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* * 细胞器及细胞骨架观察 实验目的： 1、进一步熟悉低倍镜、高倍镜及油镜的使用； 2、观察细胞器在光镜下的形态结构； 3、学习细胞骨架简易制片及观察方法。 二、实验内容 1、高尔基体观察（脊神经节切片） 2、线粒体观察（小肠横切片） 3、中心体观察（马蛔虫子宫切片） 4、细胞骨架标本制备及观察（洋葱表皮） 细胞器观察注意事项： 1、先在低倍镜下观察，找到需放大观 察的结构，转换高倍镜观察。只有线 粒体标本需用油镜观察 （见实验指导P40-41）。 2、油镜的正确使用方法，镜头、玻片 标本的及时清洁。 细胞骨架标本制备（P41） 当细胞用适当浓度的triton X —100溶液 （聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子 去垢剂）处理，能够溶解质膜结构中及 细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋 白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰 （非特异性蛋白质染料）染色后，胞质 背景着色弱，有利微丝的显示，可在光 镜下观察到由微丝组成的纤维束。 方法 1.将0.5×0.5cm大小的洋葱表皮细胞置于小 培养皿中，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤3次， 每次3分钟。 2. 将洋葱表皮细胞浸在1%tritonX-100液中， 置于37℃恒温箱处理20~30分钟，以除掉骨架 以外的蛋白质。 3.立即用M-缓冲液轻轻地洗涤3次，每次3分钟， 使细胞骨架稳定。 4.在3%戊二醛液中固定10分钟，再以PBS液洗 3次，每次5分钟，吸去多余液体。 5.滴加0.2%考马斯亮兰染液染色10分钟，自来 水冲洗，空气干燥,镜下观察。 结果 在光镜下可见一些充分伸展的成纤维细胞中，分布着被染成深兰色的细直纤维，这就是由许多微丝聚集成的最大的微丝束，也称张力纤维，它们多沿细胞长轴方向、细胞突起而分布，在有些细胞（多角形）中则一组组纤维沿不同方向交叉分布，在洋葱表皮细胞中可见交织成网状结构。 。 作业： 绘2种细胞器显微结构图。 *
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