电喷雾质谱法定量分析细胞色素C-皂苷非共价键复合物.pdfVIP

亿 学与 生物 互程 2011，voI．28No．1 ~lffllliit困 Chemistry Bioengineering doi：10．3969／j．issn．1672—5425．2011．O1．026 电喷雾质谱法定量分析细胞色素 C-皂苷非共价键复合物 苏 波 ，王 献 (中南民族大学化学与材料科学学院，湖北 武汉 430074) 摘 要：以中药皂苷提取物人参皂苷 Re、柴胡皂苷 A、柴胡皂苷 C为配体 ，采用电喷雾质谱法(EsI-Ms)检测其与细 胞色素 C形成的复合物 ，用直接计算法得 出3种皂苷与细胞色素 C形成的 1：1非共价键复合物的解 离常数 Kd-分别 为 3．6×10 mol·L～、4．1×10 mol·I 和 2．5×10 otol·L～ ，得 到皂苷 配体 分子与细胞 色素 C结合能力大小依 次为 ：柴胡皂苷 C人参皂苷 Re柴胡皂苷 A。为研 究细胞色素c所形成的非共价键复合物的性质和特异性提供 了实 验依据，也进一步验证 了ESI—MS是研究蛋 白质非共价键复合物的有效分析手段 。 关键词 ：电喷雾质谱 ；细胞色素 C；皂苷 ；解离常数 中图分类号 ：O657．63 文献标识码 ：A 文章编号 ：1672—5425(2011)O1—0085—04 电喷雾质谱法 (ESI—MS)是一种软电离技术 ，因其 中过氧化脂质等功效 ，对心血管疾病有较好的疗效 ；人 灵敏度高、快速和质量精确度 高等优点已经广泛应用 参皂苷 Re已被证实具有抑制 中枢神经、促进 DNA、 于非共价键化合物的检测和研究[1j。电喷雾质谱法 RNA和血清蛋 白质合成 、促进蛋 白质分解酵素活性 可以在离子化过程 中尽量避免复合物在源 内发生裂 化、刺激副肾皮质荷尔蒙分泌等作用Ll】。柴胡皂苷是 解，并保持分子问弱的非共价键作用 ，因此在生物大分 柴胡根的主要活性成分，具有抗炎、抗病毒、抗肿瘤 、调 子及其复合物 的研究 中有着独特 的优 势。。“]，并且很 节内分泌及免疫系统等作用 ，广泛用于 肾病 、肝纤维 容易推导出复合物的化学计量 比l5]。 化、肿瘤等疾病的治疗_1。 复合物的稳定性可以通过解离常数或者结合常数 作者采用 ESI—MS法对细胞色素 C和 3种三萜皂 进行量化 ，其中解离常数 Kd的计算主要采用滴定法 苷 (人参皂苷 Re、柴胡皂苷 A和柴胡皂苷 C，图 1)形 和直接计算法。滴定法是一种比较经典的计算方法， 成的非共价键复合物进行了分析检测，用直接计算法 计算结果可靠 ；近年来 ，直接计算法发展迅速 ，许多不 得到 3种皂苷与细胞色素 c复合物 的解离常数 Kd ， 同计算公式所得 到 的结果和滴定法 的结果相互 吻 确定了皂苷配体分子与细胞色素 c结合能力的大小。 合u,83，且直接计算法更快速简便。 1 实验 细胞色素 C是一种细胞色素氧化酶，是电子传递 链中唯一的外周蛋白。由于体积小 、容易被离子化 、结 1．1 药品与仪器 构已知 ，细胞色素 C作为一种模 型蛋 白受到广泛关 马心 中的细胞 色素 C(分子量 12359，纯度 ≥ 注 ，但对细胞色素 C和配体形成的非共价键复合物的 95 )，Sigma—Aldrich公 司；人 参皂苷 Re(分 子量 质谱法研究较少 9『]，而且结合机制尚不清楚 ，对配体的 947．14)、柴胡皂苷A(分子量 780．98)、柴胡皂苷C(分 选择还需要进一步的研究 。 子量 927．12)，纯度均 ≥98 ，上海 晶纯试剂有限公 皂苷 (Saponin)由皂苷元与糖构成，广泛分布在植 司。样品均由超纯水溶解 ，无需进一步纯