聚合物基质高效液相色谱填料在白细胞介素分离中的应用.pdfVIP

第9N 卷 分析化学 （.@OX3 0?4X?@ ） 研究报告 第C 期 #%%M 年C 月 2Y;EGE ZIQFJH I[ 4JHDV;SJH 2YE:;GVFD N%N B N$% 聚合物基质高效液相色谱填料在白细胞介素!! 分离中的应用 魏荣卿 张婷婷 邵勇军 刘晓宁# （南京工业大学制药与生命科学学院，南京#$%%% ） 摘 要 聚合物型苯乙烯!二乙烯基苯（’(!)*+ ）微球装填的麦科菲反相高效液相色谱柱（,-.!/’!0’12 ）， 用于白细胞介素!# （31!# ）分离的最佳色谱条件：流动相4 ：% 5 $6 三氟乙酸，流动相+ ：7%6 乙腈8 % 5 $6 三氟乙 酸。+ 液在9% :; 内从%6 线性增大至$%%6 ，流速$5 % :1= :; ；检测波长：#7% : 。在该色谱条件下进行系 统性实验，结果表明： ,-.!/’ 色谱柱分离31!# 的柱效、分离度、重复性和拖尾因子均能达到药典要求，且柱效和 分离度与(?/2@ 色谱柱相当；,-.!/’ 色谱柱的A0 适用范围为$ B $C ；柱压与(?/2@ 色谱柱相当，且低于 0DAEFG;H 27 色谱柱和’IHJF;G 2$7 色谱柱的柱压，可在更高流速下操作；,-.!/’ 色谱柱的非极性与(?/2@ 色谱 柱相当； ,-.!/’ 色谱柱的超载性能优于(?/2@ 色谱柱，其对31!# 进样液的最大载样量为9%% !K 。 麦科菲反相色谱柱 关键词 白细胞介素!# ，苯乙烯!二乙烯基苯，反相高效液相色谱， # 引# 言 白细胞介素!# （31!# ）!参与正常细胞和癌细胞的生长、免疫细胞识别及炎症等的生理和病理状态的 ［$］ 调控 ，是近年来最受重视的淋巴因子之一。在临床上的应用研究结果表明：31!# 具有广谱免疫增强作 ［# ］ 用，能增强细胞毒性T 细胞（T2 ）的杀伤效应，直接激活+ 细胞，提高T 细胞淋巴瘤活性 。 ［9 ］ 近几年，已有大量文献作了有关31!# 分离纯化方面的报道 ，31!# 的分离纯化包括多步过程，但最 后一步使用最多的是采用反相高效液相色谱手段将31!# 纯化到均一状态［$］。由于目前商品化的色谱 填料大部分为硅胶基质的填料，较多文献的中31!# 的分离纯化均利用硅胶基质键合不同长度烷基链的 ［9 ，C ］ 色谱填料进行31!# 的反相高效液相色谱分离分析 ，流动相多为含有%5 $6 三氟乙酸的水和乙腈，这种 分离条件有其本身固有的缺点：一方面流动相A0 值较低对硅胶基质的色谱柱使用寿命影响较大；另一方 ［C ］ 面硅胶填料表面进行了烷基化，31!# 与烷基链之间会产生较强的作用力，使31!# 较难被洗脱下来 。 根据文献报道，粒径单分散的苯乙烯!二乙烯基苯共聚物（’(!)*+ ）微米级微球已被应用于蛋白药 物的反相色谱分离［N ，L ］。这种色谱填料适用的A0 变化范围宽（A0$ B $C ），在强酸、强碱、水和有机溶剂 条件下，填料的机械和化学性能稳定。与硅胶填料不同， ’(!)*+ 微球的表面为苯基，31!# 与苯基的非 极性作用要小于31!# 与烷基链的非极性作用，避免了使用较高浓度的