不同诱变方法对黄嘌呤氧化酶活性的影响.docVIP

  不同诱变方法对黄嘌呤氧化酶活性的影响# 陈素华，许小平** （福州大学化学化工学院，福建，福州，350116） 5 10 15 20 25 30 35 40 摘要：以产黄嘌呤氧化酶菌株 Arthrobacter X 为出发菌，采用紫外（UV）,硫酸二乙酯（DES） 单因子诱变,以及紫外结合氯化锂（UV+LiCl）、紫外结合微波（UV+微波）的复合诱变方 法对 Arthrobacter X 进行诱变。对诱变后的高产菌株 UV-4、ULi-10、UW-5 作遗传稳定性试 验，其中 UW-5 在连续传代 6 次后其遗传性状较 UV-4、ULi-10 更为稳定，其产酶活力比出 发菌株提高了 63.46%，XOD 比活力也提高了 56.66%。是一株比较理想的黄嘌呤氧化酶高 产菌株。 关键词：黄嘌呤氧化酶；复合诱变；筛选 中图分类号：TQ464.8 Effect on the Activity of Xanthine Oxidase by Different Mutation Methods CHEN Suhua, XU Xiaoping (College of Chemistry and Chemical Engineeing, Fuzhou University, Fujian 350116，China) Abstract: Various mutating methods including ultraviolet(UV), diethyl sulfate (DES) and complex mutagenesis (combination of LiCl and ultraviolet rays, ultraviolet rays and microwave irradiation were employed to deal with a xanthine oxidase producing strain Arthrobacter X. Then the high-yielding mutant strains UV-4, ULi-10, UW-5 were tested for genetic stability. After successively cultured six times found that heredity character of UW-5 was stabler than UV-4, ULi-10. Its enzyme activity increased by 63.46% and XOD specific activity increased by 56.66% over the original strain. Key words: Xanthine oxidase; complex mutagenesis; screening 0 引言 黄嘌呤氧化酶（xanthine oxidase）简称 XOD(EC.122)是生物体内核酸代谢过程中重要的 酶类[1]，黄嘌呤氧化酶在生理环境条件下能够催化核苷的代谢产物次黄嘌呤先氧化形成黄嘌 呤，再进一步氧化生成尿酸和过氧化氢，其氧化产物尿酸和氧自由基具有重要的生理及病理 功能。因此，该酶正在被开发成为一种具有高价值的商业用酶，应用于检测血清无机磷[2]、 血清超氧化物歧化酶活力、细胞损伤后胞外次黄嘌呤和黄嘌呤水平以及次黄嘌呤核苷（肌 [3] 解亚硝基盐、三硝基苯甲硝胺等土壤和地下水污染也有重要作用。因此开发和研究 XOD 具 有重要理论意义和广阔的应用前景。但野生型 XOD 菌株代谢较低，不能满足大规模工业生 产的需求。因而选育和改良 XOD 高产菌株就显得十分重要，目前常用的选育方法为诱变育 种。本试验采用各种诱变方法对一株黄嘌呤氧化酶产生菌 Arthrobacter X 进行了处理，同时 探讨了诱变因素对其产酶能力的影响，以期提高其产黄嘌呤氧化酶的能力，为高产菌株的选 育制定依据，为黄嘌呤氧化酶的工业化生产提供一条新的绿色途径。 基金项目：高等学校博士学科点专项科研基金（No.20103514110002） 作者简介：陈素华（1984-） 女，硕士研究生，研究方向: 生物化工 通信联系人：许小平（1962-） 男，博士，教授，博士生导师，研究方向: 生物化工. xu@fzu.edu.cn -1- 1 材料与方法   45  1.1 1.2  菌株 Arthrobacter X 菌株，本实验室保藏。 培养基 种子培养基：NaCl 5.0g/L，牛肉膏 3.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，pH 值 7.5。 初筛培养基：NaCl 5.0g/L，牛肉膏 3.0g/L，蛋白胨 10.0g/L，黄嘌呤 0.76g/L，琼脂 15g