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STAT5 基因沉默对哮喘小鼠 T 淋巴细胞增殖的影响 中文摘要 目的：通过体外实验研究，探讨 STAT5a/b 基因沉默对哮喘小鼠 T 淋巴细胞增殖 功能的影响，为进一步明确哮喘发病机制、寻找基因治疗哮喘新靶点提供理论依 据。 方法：采用腹腔注射和反复雾化吸入卵清蛋白法建立小鼠哮喘模型，免疫磁珠筛 选出正常及哮喘模型小鼠的脾脏 T 淋巴细胞，利用 RNA 干扰（RNAi ）沉默 T 淋巴细胞内 STAT5a/b 基因。荧光定量PCR 检测 STAT5a/b 基因沉默前后 STAT5a/b 的mRNA 表达变化；蛋白免疫印记法检测 STAT5a/b 基因沉默前后的蛋白含量的 变化；CCK-8 检测 T 淋巴细胞 RNAi 前后增殖率的变化；流式技术检测 T 淋巴 细胞干扰前后细胞增殖周期及早期凋亡率的变化。 结果：(1) 哮喘小鼠气道内炎症细胞浸润明显，其肺泡灌洗液中嗜酸性粒细胞、 淋巴细胞及中性粒细胞数较正常组小鼠均显著增高；(2) 哮喘组小鼠脾脏淋巴细 胞 STAT5a/b 表达量较正常组小鼠明显增高；(3) 特异性 siRNA 转染哮喘小鼠的 T 淋巴细胞后，STAT5a 和 STAT5b 的mRNA 表达及蛋白表达较空白对照组、错 义链组均明显降低；(4) 哮喘小鼠 T 淋巴细胞内 STAT5a/b 被特异性 siRNA 沉默 后，CCK-8 检测结果提示其 T 淋巴细胞增殖率较空白对照组、错义链组均明显 降低；(5) 哮喘小鼠 T 淋巴细胞内 STAT5a/b 被特异性 siRNA 沉默后，流式细胞 仪检测结果提示其增殖期 T 淋巴细胞较空白对照组和错义链组均明显降低；(6) 哮喘小鼠 T 淋巴细胞内 STAT5a/b 被特异性 siRNA 沉默后，其 T 淋巴细胞凋亡率 较空白对照组和错义链组均明显升高。 结论：STAT5a/b 是介导 T 淋巴细胞增殖的重要转录因子，哮喘小鼠 T 淋巴细胞 中 STAT5a/b 的表达量均较正常组小鼠T 淋巴细胞表达高，RNA 干扰能特异性降 低 STAT5a/b 表达、抑制 T 淋巴细胞的增殖、促进 T 淋巴细胞凋亡。STAT5a/b 有望成为 RNA 干扰技术治疗哮喘的新靶点。 关键词：哮喘，T 淋巴细胞，STAT5a，STAT5b，RNAi ，增殖 I Effect of STAT5 gene silencing on the proliferation of T lymphocytes in a mice model of asthma Abstract Objective ：Silence STAT5a/b genes of T lymphocytes in vitro and discuss the effect of silencing STAT5 gene on the proliferation function of T lymphocytes. Provide a theoretical basis for clarifying the pathogenesis of asthma furtherly, and look for more targeted treatment methods. Methods ：BALB/c mice were sensitized with ovalbumin through Intraperitoneal injection, repeated challenged with exposure to aerosolized ovalbumin. Normal and asthma spleen T lymphocytes were selected by immunomagnetic bead, and the STAT5a/b genes of these T-lymphocytes were silenced by siRNA. We detected the mRNA of STA