PCR结合核酸斑点杂交技术检测转基因番茄研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第5期，2013年9月 of Sci—Tech Journal Zhejiang University V01．30，No．5，Sept．2013 文章编号：1673—3851(2013)05—0747—06 PCR结合核酸斑点杂交技术检测转基因番茄研究 梁彦君，陈文虎．王梦娜，许爱霞，冯俊丽 (浙江理工大学生命科学学院生物工程研究所，杭州310018) 摘要：基于转基因番茄的安全性评价，建立健全番茄转基因检测体系尤为迫切。文章采用转基因作物检测常 用的传统定性P(、R技术和核酸斑点杂交技术，针对转基因番茄中常用的35S(花椰菜花叶病毒启动子)、NOS(胭脂 参基因)，检测了阳性对照质粒PBll21、华蕃一号样品和阴性对照合作903番茄。从华蕃一号中成功检出35S、 检测灵敏度高，两种方法相互补充，排除假阳性。核酸斑点杂交一次可检出多个外源基因，增加了检测通量，为我国 番茄转基因检测提供参考。 关键词：转基因番茄；外源基因检测；定性PCR技术；核酸斑点杂交 中图分类号：Q788 文献标志码：A 信会有越来越多的转基因作物问世并进入人们的生 0 引 言 活，因此健全和完善转基因物种外源基因检测体系 番茄是重要的蔬果产品，我国是番茄出口大国。 就显得很有必要L5J。 自20世纪90年代第一例转基因番茄培育成功以 目前转基因番茄检测方法中，大致分为核酸检 来，番茄转基因技术发展迅速，番茄的耐储藏、抗病 测方法和蛋白质检测方法两大类[6]。核酸检测中包 毒、抗逆性等转基因品系相继培育成功[1]。1996括PCR技术、real一timePCR技术、多重PCR技术、 年，我国华中农业大学也成功将番茄中乙烯合成酶 基因的反义抑制链导人番茄植株，培育出我国第一 测中主要使用酶联免疫吸附技术。一般根据不同作 个获准商业化的转基因品种华蕃一号[2]。然而转基 物选择合适的方法体系。当前转基因番茄检测的方 因产品的安全性和合理性一直以来备受争议，所以 法日趋成熟，涉及的检测方法基本涵盖了常用的检 围绕转基因植株的外源基因检测方法也备受关注。 测技术，但是在方便性和可靠性等方面仍然需要探 包括中国在内的多个国家和地区针对转基因产品， 索[8]。本文探究转基因检测方法中的PCR和 尤其是农产品制定了一系列法律法规，欧盟国家要 Northern斑点杂交技术，两种技术结合可保证结果 求要严格保护消费者的知情权，对转基因食品明确 的可靠性，斑点杂交实验中1个样品4个重复来保 标识[3]。此外，随着人口膨胀，世界性的粮食问题凸 证实验的重复性。在同一张膜上同时检出了3个外 显，全世界转基因农作物的数量逐年上涨，包括大 源基因和1个种属内参基因，实现了检测量的优化， 豆，玉米，番茄，辣椒，棉花等作物均有一定数量的种 成本较低，结果可靠性良好，操作简单，可以为转基 植，并进入市场[4]。在生物技术突飞猛进的时代，相 因番茄检测方法提供参考。 收稿日期：2012—11—28 基金项目：国家质检总局科研项目(2012lK290) 作者简介：梁彦君(1987一)，男，甘肃陇南人，硕士研究生，主要从事植物病毒与天然药物生物反应器。 通信作者：冯俊丽，电子邮箱：fen西unli0722@yah∞．co札cn 万方数据 浙江理工大学学报 2013年第30卷 mix 2．5牲L，dNTP2弘L，上下游引物各1弘L，模板 1材料与方法 1肛L，H孓Taq