端粒酶RNA模板定点突变对肿瘤细胞Bcap37的作用研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第30卷，第5期，2013年9月 of Sci—Tech Journal Zhejiang University V01．30，No．5，Sept．2013 文章编号：1673—3851(2013)05—0753—05 端粒酶RNA模板定点突变对肿瘤细胞 Bcap一37的作用研究、 韦敬航，杨力媛，郑洁，吕 齐，何丹枫，刘小川 (浙江理工大学生物工程研究所，杭州310018) 摘要：端粒酶在正常体细胞中极少表达，而在大多数人类恶性肿瘤和细胞系中高度表达，这暗示着端粒酶活 性可能与肿瘤密切相关。本研究以人乳腺癌细胞株Bcap_37接种裸鼠形成的肿瘤组织块为实验材料，通过检测端粒 酶活性、端粒长度及细胞凋亡的情况，观察端粒酶RNA模板定点突变的作用。结果显示：MT-hTER组样本的端粒 酶活性低于对照组，端粒长度短于对照组，细胞核形态不够稳定，有较多细胞凋亡的现象，而对照组细胞核形态稳 定，较少发生细胞凋亡。以上结果提示着端粒酶RNA模板定点突变在一定程度上改变了人乳腺癌细胞株Bcap-37 的端粒酶活性、端粒长度及细胞凋亡发生率。 关键词：人乳腺癌细胞株Bcap-37；端粒酶活性；端粒长度；细胞凋亡 中图分类号：Q243 文献标志码：A 的表达会抑制人肝癌细胞的端粒酶活性并下调端粒 0 引 言 平均长度[8]。TER分为模板区和非模板区，模板区 端粒是真核细胞线性染色体末端的特殊结构， 序列决定端粒酶所合成端粒DNA的序列特异性， 由非编码DNA重复序列和端粒结合蛋白构成[1]。 非模板区则提供底物的结合位点[9]。hTER含有 端粒在细胞持续分裂中逐渐缩短，达到极限长度时 会引发细胞衰老及死亡[2‘3]。若端粒的长度得到稳 3，[10]，位于46～56区段。研究表明，在人肿瘤细胞 定维持，细胞就可能推迟衰老和死亡。端粒的延伸 需要端粒酶的作用。端粒酶的结构主要由三部分组 酶活性的改变以及突变端粒DNA的合成，但对肿 成：端粒酶逆转录酶(TERT)、端粒酶RNA(TER) 及端粒酶相关蛋白[4]。端粒酶以自身RNA为模板， 在Ⅷ汀的催化下逆转录合成端粒DNA并添加至低水平表达MT-hTER可抑制肿瘤细胞生长并诱 端粒的末端，使端粒得到延伸，但端粒酶在正常体细 导细胞凋亡。Li等[13]发现在肿瘤细胞中过表达 胞中不表达，而在大多数人类恶性肿瘤和细胞系中高 度表达。这提示着端粒酶活性与肿瘤密切相关，因此 以端粒酶为靶标的肿瘤治疗研究受到广泛的关注。 抑制肿瘤细胞生长并诱导细胞凋亡[14|。这表明，端 TERT和TER均对端粒酶活性具有重要作粒酶RNA模板的突变可在一定程度上改变某些类 用。研究表明，人端粒酶逆转录酶(hTERT)的表达型肿瘤细胞的端粒酶活性，抑制其生长以及诱导细 水平与端粒酶活性呈正向相关[5。]，以及显性失活 胞凋亡。人端粒酶RNA模板序列含有11个核苷 hTERT，DN—hTERT) hTERT(Dominant—negative 酸，定点突变对不同类型肿瘤细胞的作用程度仍需 收稿日期：2012—12—10 基金项目：浙江省大学生科技创新活动计划(新苗人才计划) 作者简介：韦敬航(1987一)，男，广西宜州市人，硕士研究生，主要从事染色体端粒、端粒酶与细胞的癌变机制研究。 通信作者：刘小川，电子邮箱：xcliu@zstu．edu．cn 万方数据 浙江理工大学学报 2013年第30卷 要深入研究。 组(灭活条件：65℃，10min)，酶促反应条件：23℃， 30min；65℃，10min。反应完毕后将酶促反应液与 因