沙利度胺联合阿霉素治疗小鼠H22肝移植瘤的实验研究及其机制的初步.pptVIP

1972年Folkman首次提出“肿瘤生长依赖血管生成”的概念。 血管生成(angiogenesis)是指在原有微血管的基础上通过“芽生”的方式形成的新生毛细血管。 人体内存在多种促血管生成因子,如血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子(TGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、表皮细胞生长因子(EGF)、基质金属蛋白酶（MMPs） 以新生血管为靶点,抑制肿瘤生成,阻断肿瘤的营养来源和迁移通道,已成为近年来国内外研究的热点 。 到2003年底，已经发现有明确抑制肿瘤新生血管生成作用的化合物已超过500余种 * * 沙利度胺联合阿霉素 治疗小鼠H22肝移植瘤的 实验研究及其机制的初步探讨 2 1 3 5 6 4 H22细胞培养 H22腹水瘤模型 H22皮下瘤模型 药物干预治疗 治疗效果观察 治疗机制初探 实验流程 沙利度胺 近年来发现其具有抗血管生成和免疫调节作用, 但是沙利度胺的抗肿瘤机制迄今尚不明确，目前倾向认为主要通过抑制新生血管形成发挥作用。 阿霉素 属于蒽环类化疗药物，其主要作用是直接嵌入DNA碱基对之间，干扰转录过程，阻止mRNA的形成而发挥抗肿瘤作用，对细胞周期各个阶段均有作用，为细胞周期非特异性药物. 血管生成 提供养分 远处转移播散 血管生成 肿瘤生长 正调 负调 Folkman提出抗血管疗法: 设想抑制肿瘤血管生成,使肿瘤细胞因缺血、缺氧而大部分死亡,从而可延缓晚期肿瘤生长,延长病人带瘤生存期,并可抑制亚临床转移灶生长,推迟复发。 这一设想为越来越多的证据所支持,并使这一领域成为肿瘤研究的热点及肿瘤治疗的新策略。 抗血管疗法 正常血管内皮细胞通常处于不分裂状态,抗血管生成治疗对正常内皮细胞影响不大 血管内皮细胞暴露在血液中,药物能够直接发挥作用 血管内皮细胞基因表达相对稳定,不易产生耐药性 作用具有放大效果,因为一个内皮细胞支持50-100个肿瘤细胞生长 小鼠异位移植性肝癌（H22）模型的建立： 1 观察腹水生成情况，腹腔接种后8－10天左右可以取用(腹水应为乳白色浓稠液体，若为黄色或有大量红细胞的血性腹水则弃之不用)。 2 断颈处死小鼠，浸泡于75％酒精，置于无菌台并固定，于上腹部剪一小口，将1ml枪头插入尽快吸出腹水，置于离心管中，加满生理盐水离心，1200rpm，10min。 3 弃上清，将细胞打散后，加入5-8ml红细胞裂解液，混匀，室温静置5min。 4 加满生理盐水, 吸取少量细胞计数，同时1200rpm，10min离心。 5 将新鲜肿瘤细胞用无菌生理盐水调整成浓度为1×107细胞/ml。 6 取40只昆明小鼠，每只小鼠腋皮下接种0.2ml（2×106细胞）细胞悬液 7 整个过程需在无菌操作下完成。标记后回笼饲养。 二 分组与给药： 1 接种次日将H22肝癌移植瘤小鼠随机分为4组：Tha组、Tha+Epi组、Epi组、NS 组，每组2-3只小鼠。 2 沙利度胺片剂(10mg) ，实验前研磨成粉末状，实验时悬于0.9％无菌生理盐水配成混悬液。 3 阿霉素针剂(10mg),实验时现用现配，用0.9％无菌生理盐水配成1mg/ml的工作用液使用。 4 Tha组给予沙利度胺200mg/kg/日，每日灌胃一次，连续给药10日。 Tha+Epi组给予沙利度胺200mg/kg/日,每日灌胃一次，连续给药10日，第一天给予腹腔注射阿霉素1-2mg/kg,只给药一次。 Epi组第一天给予腹腔注射表阿霉素1-2mg/kg,只给药一次。 NS组给予生理盐水0.3ml/日，每日灌胃一次，连续给药10日。 5 每3天测量体重一次，根据体重调整用药剂量。 6 停药次日脱臼处死，完整剥离肿瘤组织。 7 用电子天平称瘤重，称重后瘤组织一部分放入行液氮冷冻后置于-80℃冰箱保存，待RT-PCR检测；另一部分用10％中性缓冲福尔马林固定后石蜡包埋，待免疫组化。 *