建立一种反向斑点杂交法检测肺炎支原体23S rRNAV区A2063G基因突变的方法.pdfVIP

中国微生态学杂志 2009年 l1月第2l卷第 11期 1033 文章编号：1005-376x(2009)11—1033-04 【技术与方法】 建立一种反 向斑点杂交法检测肺炎支原体 23SrRNAV区A2063G基 因突 变的方法 沈俊娅 ，范骏 (浙江大学医学院附属第一医院 传染病诊治国家重点实验室，浙江 杭州 310003) 【摘要】 目的 建立检测肺炎支原体 (Mycoplasmapneumoniae，MP)23SrRNAV区2063基因型的反向斑点杂 交方法，并与PCR产物直接测序法的结果进行比较分析。方法 19例 自临床咽拭子标本分离培养的MP，用 自行 设计的反向斑点杂交法检测23SrRNAV区2063基因型，同时对相应序列测序分析。抽提标准菌株 FH和 127份 经PCR测定 MP阳性的临床标本基因组DNA，用MP阴性的基因组DNA抽提物5份作阴性对照，用反 向斑点杂交 法检测23SrRNAV区2063基因型。结果 19例分离培养的MP，经反向斑点杂交法检测 15株有23SrRNAV区 基因A2063G位点突变 ；4株为 2063A ，与测序结果一致 (Kappa一致性检验，P0．05)。经反向斑点杂交法检测， 127份 MP阳性的基因组 DNA抽提物中有 122份标本为 A2063G位点突变 ，标准菌株 FH和2份DNA抽提物的 2063位点碱基为A，还有3份抽提物标本的2063位点碱基既有A又有 G，5份阴性对照均元显色。结论 反向斑 点杂交方法能快速、准确检测临床 MP23SrRNAV区2063基因型。 【关键词】 肺炎支原体；聚合酶链反应；基因突变；反向斑点杂交法 【中图分类号】R375．2 文【献标识码】B DetectionofA2063G genemutationin23SrRNA domainV ofMycoplasmapneumon- iaebyareversedot-blothybridization ． SHENJun．ya．FANJun (TheFirstAffiliatedHospitalof撇 UnwemitySchoolofMedicine，Hangzhou310003，China) A【bstract】 Objective Toestablishareversedot-blothybridizationindetectingthegenotypesof23SrRNAdomain V ofMycoplasmapneumoniaeandcompareitwitllthedirectsequencingmethod．MethodA self-designed~versedot—blot hybridizationwasappliedtodetectthegenotypesof23SrRNAdomainV ofMycoplasmapneumoniaein19clinicalisolates from oropharyngealswba s．andthecorrespondingsequencew嬲l sequencedmeanwhile．ReferencestrainsFH and127Myco— plasmayneumoniaeDNA extractionsfrom patientspecimenstestedpositivebyPCR，with5Mycoplasmapneumoniaenega— tiveDNA extractionsascontrols，weredetectedmacrolideresistantgenotypesof23SrRNAdomainV bythereversedot—blot hybridizationmethod．Re