禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiA ．Sci．2011。39(28)：17330—17331。17333 责任编辑 庆 瑭 责任校对 况玲玲 禽流感病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 李娜 ，张保平 ，秦爱建 (1．湖南文理学院生命科学学院，湖南常德4l5000；2．常德职业技术学院生物工程系，湖南常德4l500o；3． 扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室，江苏扬州 225009) 摘要 采用饱和硫酸铵初步纯化的兔抗AIV—H9高免血清中的IgG作为包被抗体，利用抗AIV—NP-7B4单抗作为ELISA的第二抗体 ，建 立了检测禽流感病毒 (AIV)抗原的双抗体夹心ELISA方法。经方阵滴定试验测定反应的最佳工作条件：兔抗 AIV—H9高免血清 IgG包 被稀释度为 l：8000(浓度为3．531 ／m1)，抗AIV-NP-7B4单抗腹水最佳使用稀释度为 1：800，酶标二抗的工作浓度为 1：4000。与其他 禽易感病毒 (NDV、IBV、EDS-76V)等均没有交叉反应。结果表明，该方法具有快速、敏感、特异等优点，可应用于AIV的检测和流行病学 调查 。 关键词 禽流感病毒；单克隆抗体；双抗体夹心ELISA 中图分类号 S852．657 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2011)28—17330—02 PreliminaryEstablishmentoftheDouble．antibodySandwichEIISA forAⅣ LINaetal (DepartmentofLifeSciences，HunanUniversityofArtsandScience，Changde．Hunan415000) Abstract A double—antibodysaudwichenzyme—linkedimmunosorbentassay(DAS—ELISA)fordetectingavianinfluenzaviurseswasdeve1． oped．Inthismethod，themicroplateswerecoatedbyIgG ofrabbitpolyclonalantibodiesagainstAIV．H9attheconcentrationof3．53l ml (1：8O0o)．PrimaryantibodyofMab-7134withl：800dilutionsandantibody—HRPof1：4000dilutionsgavethebestresuh．NoCROSS．reaction wasobservedwithNDV，IBV，andEDS一V A1loftheseresultsshowedthatDAS—ELISA methodwasquick，sensitiveandrepeatable．which wasapplicabletothedetection ofAIV andepidemiologicalinvestigation． Keywords Avianinfluenzaviruses：Monoclonalantibody；Double—antibodysandwichELISA 禽流感(AvianInfluenza，AI)是由流感病毒引起的一种 减蛋综合征病毒(EDS．。V)，均为扬州大学兽医学院江苏省 发生于禽类的病毒性传染病 。目前用于AI监测的方法有 动物预 防医学重点实验室保存 ；SPF鸡胚 ；购 自山东 很多，酶联免疫吸附试验 (ELISA)具有灵敏度高、可标准化 SPAFAS鸡厂 ；ELISA抗体 ：兔抗 AIV-H9亚型高免血清，由 操作 、结果易于分析等特点，因此在禽流感病毒检测过程中 扬州大学兽医学院江苏省动物预防医学重点实验室保存。 占据非常重要 的地位。Jennings等 于 1974年首先利用 二抗：HRP标记羊抗 鼠IgG，购 自Singma公司，其工作浓度为 ELISA方法检测流感病毒抗体，结果表明该法在流感的检测 1：4000稀释。 上得到 良好 的应用。Shodihall 首先建立双抗夹心 ELISA 1．2 方法 方法检测禽流感病毒，大大缩短了诊断时间，并且具有较高 1．2．1 获取。病毒的增殖 ：将禽流感(H9C1)病毒接种于9 的特异性及灵敏性 ，结果判定不需要特殊仪器