辣椒果实中CaRIN转录因子的克隆及其表达分析.pdfVIP

植物生理学通讯 第45卷 第 l1期，2009年 11月 1075 辣椒果实中CaRIN转录因子的克隆及其表达分析 胡宗利，王燕，王翊，陈国平 重庆大学生物工程学院，重庆400044 提要：根据BLAsT获得的表达序列标签设计引物，从辣椒 中分离并鉴定了一个新型转录因子，命名为CaRIN 与已知MADS— box蛋白对比表明，CaRIN分别与番茄LeMADS。RIN和矮牵牛FBP4有85％和77％的同源性，并且具有典型的MADS—box 类转录因子的特征区域。采用半定量RT．PCR进行特异性表达分析，结果表明CaR[N在破色期和红熟期辣椒果实中大量表 达，而在绿熟期辣椒果实和其他辣椒器官中几乎不表达；同时进行了DNA结合位点和系统发生等生物信息学分析，这些结 果都表明CaRIN可能参与辣椒果实成熟的调控。 关键词：辣椒；CaRIN；MADS．box；克隆；半定量 RT—PCR CloningandAnalysisofExpressionofCaRINTranscriptionFactorfrom Pep- per(CapsicumannuumL．CV．Bukang)Fruit HU Zong—Li，WANG Yah，WANGYi，CHEN Guo—Ping CollegeofBioengineering，ChongqingUniversity，Chongqing400044，China Abstract：SpecificprimersweredesignedbasedontheEST sequenceswhichwereobtainedaccordingto BLAST．AnoveltranscriptionfactorCaRINwasisolatedandcharacterizedfromthechilipepper(Capsicum annuumL．CV．Bukang)．ComparedwithknownMADS—boxproteins．CaRINhad85％and77％sequence homologywithLeMADS．RIN from tomatoandFBP4from petuniarespectively，andcontainedtypicalstruc— turalcharacteristicsofMADS．boxtranscriptionfactors．Analysisoftissue．specificexpressionofCaRlN was performedbysemi．quantitativeRT．PCR．TheresultshowedthatC口尺 mRNAwasexistingmainlyinbreaker andredripeningfruits，buthardlydetectableinmaturegreenfruitandotherorgansofpepper．Bioinformatic analysises，suchasDNA—bindingresiduesandphylogeneticanalysis，suggestedthatCaRIN wereinvolvedin regulatingpepperfruitripening． Keywords：pepper；CaRIN；M ADS—box；cloning；semi—quantitativeRT．PCR 采后的果蔬仍是一个活的有机体，有活跃的生 突变体的研究表明，乙烯并非果实成熟调控的惟一 理代谢过程，存在着果蔬成熟衰老所导致的自身耐 关键因子，果实成熟过程中还存在着许多调节因子， 贮性、抗病性下降等问题，是果蔬采后损失的因素 但其调控机制仍不清楚(Vrebalov等2002)。 之一。果蔬成熟衰老是一个高度程序化调控的复 番茄rin突变体的乙烯生成受到抑制，所以果 杂的生物学过程，涉及到一系列的生理和生化变 实不能正常成熟，同时还表现出萼片增大和花序决 化。根据果蔬的成熟衰老特性，果蔬常分为呼吸跃 定功能丧失。Vrebalov等(2002)报道，rf突变体之 变型和非跃变型两类 。在呼吸跃变型果实的成熟 所 以不能正常成熟，是因为它的一个MADS—box转 过程中，由于乙烯对成熟有调控作用，所 以对其