产甘油假丝酵母TRP1基因的克隆与功能分析.pdfVIP

微生物学通报 NOV20，2009，36(11)：1795~1800 M icrobiology @ 2009byInstituteofMicrobiology，CAS tongbao@im．ac．cn 产甘油假丝酵母TRP1基因的克隆与功能分析 沈 微 王正祥 李艳丽 王 丹 饶志明 方慧英 诸葛斌 诸葛健 (1．江南大学生物T程学院T业生物技术教育部重点实验室 江苏 无锡 214122) (2．浙江省农业科学院植物保护与微生物研究所 浙江 杭州 310021) 摘 要：产甘油假丝酵母(Candidaglycerinogenes)WL2002—5是我国发酵甘油生产菌种，具有高 产甘油和耐高渗透压的优 良性能。本文采用遗传互补的方法从产甘油假丝酵母基因文库 中克隆了 豫尸，基因(Cg豫PJ)。序列分析显示，该基 因编码区全长 735bp，编码的磷酸核糖氨基苯甲酸同分 异构酶(CgPRAI)氨基酸序列与其他酵母来源的PRAI蛋白同源性在 32．9％～49．2％之间。功能互补 实验显示，c豫P 基 因在高拷贝情况下可以互补酿酒酵母trpl基因功能但在低拷贝情况下只能部 分互补酿酒酵母 trpl基 因功能，是一条功能明确、结构完整的酵母新基因。在 豫JpJ基 因下游 发现另一蛋白编码基因，编码的氨基酸序列与酵母无机焦磷酸酶有很高的相似性。 关键词：产甘油假丝酵母，磷酸核糖氨基苯甲酸同分异构酶，trpl缺 陷 CloningandFunctionalAnalysisoftheCandida glycerinogenesTRP1Gene SHENWei WANGZheng—Xiang LIYan—Li WANG Dan RAOZhi—Ming FANGHui—Ying ZHUGEBin ZHUGEJian (1．KeyLaboratoO,ofIndustrialBiotechnologyofMinistryofEducation，SchoolofBiotechnology，SouthernYangtzUniversity， Wuxi，Jiangsu214122，China) (2．InstituteofPlantProtectionandMicrobiology，Zh~iangAcademyofAgricultureSciences，Hangzhou，Zh~iang310021，China) Abstract：CandidaglycerinogenesⅥ 2002—5iSanosmotolerantyeastusedforthecommercialproduction ofglycero1．豫P，geneofCandidag~,cerinogenes( 豫P encodingphosphoribosylanthranilateisom— erase(PRA1)wasclonedbycomplementationofthetrplmutationofSaccharomycescerevisiaeW303—1A． Sequenceanalysisrevealedthepresenceofa735bpopenreadingframe(ORF)encoding244aminoacids protein，whichshares32．9％-49．2％aminoacidssequencesimilaritytoPRAIproteinsfrom otherspeciesof Saccharomycetales．Functionalnaalysisreveal，highcopynumberofCgTRPIcancomplementthetrplmu— tationofS．cerevisiaecompletely，butlow copy