产漆酶木腐真菌的筛选、鉴定及部分酶学性质.pdfVIP

产漆酶木腐真菌的筛选、鉴定及部分酶学性质 王剑锋。，李江 ，饶军 ，王璋 1(东华理工大学生物系，江西 抚州 ，344000) 2(中国食 品发酵工业研究院，北京 ，lo0O27) 摘 要 综合菌体培养方式和培养基组成对菌株产漆酶性能的影响，对 68株木腐菌进行 了筛选 ，获得 了 l株适 合液态发酵产漆酶 的漏斗多孑L菌 A08，酶学性质研 究表 明，漆酶反应最适温度为 60—65℃，最适 pH为5．5，60℃ 时酶活半衰期大于45min，20℃酶活性在 pH3．0—9．0稳定 ，漆酶活性受cl一、ca“、Fe 抑制，Mn 激活，K 、 Mg“ zn“ 、 、 cu 等对酶活性没有显著影响。 关键词 漆酶，漏斗多孔菌，酶学性质 ，培养方式 漆酶 (LaccaseEC1．10．3．2，对苯二酚：氧化还原 1 材料与方法 酶)是种含多个铜离子的多酚氧化酶 ，它能够催化 250多种有机物发生氧化 、聚合等反应 ¨，特别是能 1．1 菌种 有效地降解多环芳烃类 (PAHs)难降解有机污染物如 实验菌株分离纯化 自腐木碎片、木腐菌子实体 。 DDT、林丹 、二嚼英 、多氯联苯 、苯并芘 、菲 、杂酚油 粗毛云芝 (cor0￡Ⅱs^ uf“s)w1l为实验室保藏菌种。 等 ，同时将氧气还原为水。因而 ，漆酶在环境修 1．2 培养基 复 、生物制浆与漂 白、绿色有机合成 、食品加工等领域 菌种保藏及种子培养基 ：PDA培养基 。 的研究应用 日益受到重视 。 产 酶 菌 种 分 离 筛 选 培 养 基 ：愈 创 木 酚 漆酶广泛分布于真菌 (尤其是 白腐真菌)、植物 (0．04％)PDA(GPDA)培养基 ，一萘酚 (0．04％)PDA 和昆虫等真核生物体 内，同时 ，编码漆酶的基 因也不 (NPDA)培养基 。 断在 G一、G 细菌 中发 现 ，如生活 于极端环 境 中的 液体发酵产酶培养基 ：以综合 马铃薯培养基 0cenno6ⅡclZus e， s、古细 百葺Pyr060cufum aer0p — (cPD)为基础产酶培养基 ，其余构成按表 l。 Zm和放线菌 s|打印0m esgrseMs等 。 目前 国内外 表 l 液体发酵产酶培养基 用于漆酶发酵研究的菌种主要集中于杂色云芝 (co— rDz“ e，co0r)、朱 红密孑L菌 (Pyc凡0pDr5cnnⅡ6口r— ns)、变色栓菌 ( 口m眦se c0z0r)，脉射菌 (P^6 r0d 0)和侧耳 (P “ ssp．)等少数 白腐真菌 ，相 对于分布广泛 、生活力强 、繁殖旺盛、变异多样 、在 自 然界木质纤维素矿化降解过程 中发挥着主导作用的 木腐菌群体 5]，绝大多数菌种 的产酶特性并未得到 1．3 菌株分离筛选与培养 有效的研究利用 ，因此，从大量野生木腐菌 中筛选漆 1．3．1 产酶菌株的分离筛选 酶高产菌株是获得适用于工业化发酵生产漆酶菌种 从子实体或腐木内取米粒大小含菌体 的组织块 的重要途径 。 (木屑)，点种于 GPDA平板，28℃培养观察 ，菌落周 文 中结合真菌漆酶的产生特点及菌株产酶的培 围呈红褐色者为产酶阳性菌落 ，切取阳性菌落边缘菌 养条件，对分离纯化的68种野生木腐菌株进