产脂肪酶酵母的筛选及其18S rDNA序列分析.pdfVIP

云南大 学学报 (自然 科学版 )。2009，31(6)：638 643 CN53—1045／N 1SSN0258—7971 JournalofYunnanUniversity 产脂肪酶酵母的筛选及其 18SrDNA序列分析 周 斌，王林刚，李海军，陈 芳，高剑峰 (石河子大学 生命科学学院，新疆 石河子 832003) 摘要：从新疆石河子地区l0分土样中，利用罗丹明B为指示剂，筛选到了90株有脂肪酶活性的酵母菌．滴 定法测量野生菌株酶活，每毫升培养液酶活为 1．1～6．6U，其中B9，c1，E7，F12等有成为生物催化剂的潜力． 扩增了其中脂肪酶活性较高的9株的18SrDNA，测序后 BLAST比对，并进行系统进化树分析，表明所得菌株分 别与 ，Rhodotorula，Trichosporon等属亲缘关系接近．进行部分生理生化试验，除H4，H8外，其它菌株结 果与 18SrDNA分析结论吻合． 关键词：脂肪酶；酵母；18SrDNA：进化树 中图分类号：Q93 文献标识码 ：A 文章编号：0258—7971(2009)06—0638—06 脂肪酶(1ipase，EC3．1．1．3)，是一类特殊的酯 肪酶提取困难且易失活，大大增加了其在工业应用 键水解酶，分解各种天然的油和脂肪．将甘油三酯 中的生产成本．目前一个降低成本的方法是 以全细 最终水解为脂肪酸和甘油 ¨，广泛应用于油脂加 胞催化剂的形式来利用脂肪酶_11．j．这样无需提 工、食品、医药、日化，生物能源等方面．脂肪酶在微 取纯化，培养细胞后简单分离就能得到具有催化作 生物界分布很广，据不完全统计，细菌有 28个属、 用的细胞，并且截留在胞内的脂肪酶有可能连续使 放线菌4个属、酵母菌 10个属 、其它真菌 23个属 用 ． 均具有合成脂肪酶的能力E2]．1834年就报道兔胰 酵母在 自然界分布广泛，酵母细胞有层相对坚 脂肪酶，1854年报道胃脂肪酶活性，1871年报道植 韧的细胞壁，在有机溶剂存在 的条件下，仍能保持 物种子脂肪酶，微生物脂肪酶则在 20世纪初才发 其结构．这种结构能有效地将酶截留在细胞 内部， 现 ．由于微生物脂肪酶种类多、来源广、周期短， 并通过细胞壁间隙与底物接触，催化反应．全细胞 具有 比动植物脂肪酶广的pH、作用温度范围以及 催化剂省去了酶的提取、固定等工序 ，并可以反复 对底物的专一性类型，又便于进行工业化生产和获 利用 ，节省了成本．因此酵母极有可能成为全细胞 得高纯度制剂，比动植物脂肪酶在酶理论研究和实 催化的工具细胞．本文 以此为出发点，从油污土壤 际应用中有着更重要的作用 。．尽管产脂肪酶微 中筛选具有脂肪酶活性的酵母菌，为研究酵母菌全 生物容易发现，但寻找适于工业规模生产的脂肪酶 细胞催化生成生物柴油打下基础．同时利用 18S 产生菌及其发酵条件却非常困难．在通过传统诱变 rDNA鉴别其分类学地位ll，有利于进一步克隆其 育种以及优化发酵条件提高脂肪酶产量方面已经 脂肪酶基因． 开展了大量的工作，并使得许多脂肪酶实现了工业 1 材料与方法 化生产，然而脂肪酶产量和活力的突破性提高还需 要依赖于基因工程．研究比较成熟的菌株有根霉、 1．1 材料 曲霉、解脂假丝酵母、青霉、毛霉、须霉、假单胞菌、 1．1．1 土样 采 自新疆石河子附近加油站、油库、 色杆菌等具有工业应用价值菌种 ～lO]．但 由于脂 粮油店，石河子大学食堂等油污土壤． 收稿 日期 ：2008—12—30 基金项 目：新疆生产建设兵团博士资金项 目资助(2006JC10)． 作者简介：周 斌(1983一 )，男，硕士生，主要从事分子生物学与生物能源方面的研究