中国不同地理来源稻曲病菌rDNA-ITS的分析.pdfVIP

第 36卷 第 5期 植 物 保 护 学 报 Vo1．36 No．5 2009年 10 月 ACTA PHYTOPHYLACICA SINICA 0ct． 2o09 中国不 同地理来源稻 曲病菌 rDNA-ITS的分析 AnalysisofrDNA-ITSofUstilaginoideavirensisolatesfrom differentgeographicalregionsin China 王永强 樊荣辉 刘 兵 张敬泽 胡东维 (浙江大学生物技术研究所，水稻生物学国家重点实验室，杭州 310029) WangYongqiang FanRonghui LiuBing ZhangJingze HuDongwei (TheStateKeyLabofRiceBiology，BiotechnologyInstituteofZhejiangUniversity， Hangzhou 310029，ZhejiangProvince，China) 稻曲病(ricefalsesmut)是 由稻曲病菌 Ustilagi— 到PS液体培养基，26℃黑暗条件下 130r／min振荡 noideavirens(Cooke)Takahashi侵染引起的一种水 培养7天。采用 CTAB法提取DNA，提取的DNA溶 稻穗部病害。它不仅影响水稻产量，而且影响水稻 解在 TE中，琼脂糖凝胶 电泳检测后于 一20℃下保 品质。近年来，我国稻曲病的发生越来越严重 ，发生 存备用 。 范围也逐年扩大，已成为我 国水稻 的重要病害。 1．3rDNA—ITS区扩增和序列测定 1991年和 1997年，日本和中国相继报道 了稻 曲病 利用弓I物 ITS4(TCCTCCGCrTATTGATATGC)、 菌的白化菌株 ；王疏等 在对 白化菌株的生物 ITS5(GCAAGTAAAAGTCGTAACAAGG)(http：／／www． 学特性、酯酶同功酶和RAPD的扩增谱等特征进行 biology．duke．edu／fungi／myeolab／primers．htm)扩增 分析后，认定它是不同于稻 曲病菌的一个新种—— 稻曲病菌基因组的ITS片段。PCR反应体系为：10× 稻 白色绿核菌 f／．albicans。Zhou等 研究表明，我 buffer5txL、10reotol／LdNTP 1IxL、25mmol／LMg“3 国浙江、辽宁、云南3个省份的稻曲病菌菌系的rD— L、10txmol／L引物各 1IxL、TaqDNA聚合酶 0．5 NA—ITS序列高度保守。但是我国的气候环境复杂 IxL、DNA模板 1txL，ddH2O补足50 L。扩增程序 多样，不同地区的气候环境有很大差异，在更广泛的 为：94℃ 5rain；94℃40S，53℃40S，72cIC1min，35 范围内是否存在更为复杂的多样性变异并不清楚。 个循环 ；72℃ 10rain。扩增产物经琼脂糖凝胶电泳 为此，本试验在全国范围内不同生态区采集稻 曲病 检测后 ，直接送上海英骏生物技术有 限公司进行双 标样 ，对更广泛范围内的稻 曲病菌的rDNA—ITS序列 向测序。 作进一步分析。 1．4rDNA—ITS序列的比较分析 1材料与方法 将获得的稻曲病菌菌系的rDNA—ITS序列整理， 1．1供试 菌系 然后登录在 GenBank(http：／／www．ncbi．nlm．nih． 供试菌系分别从辽宁、陕西、河南