地方流行性牛白血病间接gp51-ELISA抗体检测试剂盒的研制.pdf

1406 中国兽 医学报 2009年l1月 第29卷 第 l1期 ChinJVetSciNov．2009 Vo1．29 No．11 地方流行性牛 白血病间接 gp51一ELISA抗体检测试剂盒的研制 吴玉石 ，周 毅 ，段宏安。，张 睿 ，徐 晔。，毕丁仁 ，石德时¨ (1．华中农业大学动物医学院湖北省预防 兽医学重点实验室，湖北 武汉 430070；2．连云港出入境检验检疫局，江苏 连云港 222042) 摘要：利用重组牛 白血病痛毒 gp51蛋 白作为包被抗原研制 了gp51-ELISA诊断试剂盒 试剂盒主要成分包括抗原 gp51包被 96孔板、HRP标记的兔抗牛 IgG和牛 白血病阴性、阳性标准血清。对试剂盒进行 了特异性、灵敏度 、重 复性及保存期试验 。结果表明，试剂盒特异性好 ，灵敏度是 AGIDT的 4～8倍，批 间和批 内的变异 系数分别小于 1O 和 15％，于一2OC¨保存至少能保持 6个月检测结果稳定。与法国Synbiotics公司同类试剂盒进行比对试验 ，诊 断敏感性、特异性和符合率分别为 75 、96．1 和94．6 。对采集于山东济南的 164份奶牛血清和进 口澳大利亚 奶牛的 398份血清进行检测，抗体阳性率分别 6．1O 和4．77％。 关键词 ：牛白血病病毒抗体 ；间接 EIISA；诊 断试剂盒 ；gp51 中图分类号 ：$852．653 文献标识码 ：A 文章编号：1005—4545(2009)11-1406—05 Developmentofindirectgp51—-enzyme。_linked immunosorbentassay kitfordetec。· tingantibodyagainstbovineleukemiavirus W U Yu—shi，ZHOU Yi。，DUAN Hong—all，ZHANG Rui，XU Ye ，BIDing—ren ，SHIDe—shi (1． CollegeofAnimalMedicine，HuazhongAgriculturalUniversity，KeyLabofPreventiveVeteri— naryMedicineofHubeiProvince，Wuhan430070，China；2．L 口” “，2gn gEntry—e．TitInspection andQuarantineBureau，Lianyungang，Jiangsu222042，China) Abstract：Anenzyme-linkedimmunosobentassaytestkitwasdeveloped usingpurified BIV gp5lprotein as coatingantigenfordetectingantibodyagainstbovineleukemiavirus．Themaincomponentsofthekitareone96一well platecoatedbygp51protein，HRP labelledrabbitanti—bovineIgG，thestandardpositive／negativeserum．Thespeci— ficity，sensitivity，reproducibilityandkeepingtimeofthekitweretested．Thesensitivityofthekitwas48foldofthe AGIDT；thecoefficiensofvarianceamongandbetweenbatchwerelessthan10 and15 respectively；stablityfor atleastsixmonthsstoredat一20℃ ．ThekitwascomparedsidebysidewithBIV ElISA kitproducedbyFrance SynbioticsCompany，theresults showed thatthe sensitivity，specificityand coincidencewere75 ，96．1 and 94．6 ，respectively．ThekitwasusedtOtest164serafrom COWSinJinancity。Shandongprovinc