RNAi技术在呼吸系统肿瘤研究中的应用.pdfVIP

3058 实用医学杂志2010年第 26卷第 16期 RNAi技术在呼吸系统肿瘤研究中的应用 石见 张庆玲 丁彦青 核 素 干扰 (RNA interference． 相关基因表达。 的高表达可以降低A549和 H460对顺 RNAi)即生物体细胞 内由双链 RNA 1．2 RNAi的特点 RNAi引起的基因 铂的敏感性 ：构建AktlshRNA慢病毒 (doublestrandedRNA，dsRNA)诱导使 沉默具有以下五种特点。(1)高特异性： 载体感染 H460细胞 ，可显著增强 其同源靶基因mRNA特异性 降解的现 siRNA 只降解 与其 同源 的特 异性 CDDP介导 的细胞凋亡 。 (2)通过 象。1998年 ，Fire等…首次将正反义链 mRNA。而对其他基因的mRNA无影 caspase路径调节凋亡。Livin是 IAPs RNA混合的双链 RNA注入秀丽线虫 ． 响，并能识别单个碱基的变化；(2)高效 (inhibitorofapoptosisproteinfamily)冢 结果诱发比单独注射正义或反义 RNA 性 ：只需要几个分子的siRNA即可产 族的成员 。与caspase．9结合后抑制其 链均更强的基因沉默 。每个细胞只要 生明显的RNAi效应；(3)传递性：RNAi 对凋亡的诱导作用 。Yuan等…运用 很少几个分子的双链 RNA就足以完全 效应可以跨越细胞界限．在不同细胞甚 RNAi沉默Livinot／13，使A549和 103H 阻断线虫及其子 1代所有同源基因的 至生物体间长距离传递 ，甚至到达全 阻滞在G0／G。检查点 ，从而抑制其增 表达 ，他们将这种现象命名为RNAi。 身，并且可以维持 3d以上 ；(4)可遗传 殖，并显著降低ADM、CDDP的Ic 值 ， RNAi技术作为一种强有力的基因阻断 性 ：RNAi效应在某些生物体内还可遗 增强肿瘤细胞对ADM和CDDP两种化 技术为肿瘤的基因治疗带来了新的希 传给子代 ；(5)高稳定性 ：长度为 21～ 疗药物的敏感性。(3)通过调节胰岛素 望。 23nt的siRNA可以逃脱非特异性干扰 样生长因子 (insulin—likegrowthfactor。 1 RNAi简介 系统的监控而不被降解。 IGF)及其 I类受体 (IGF．IR)调节凋 1．1 RNAi作用机制 RNAi的确切机 2 l Aj在呼吸系统肿瘤研究中的应 亡。 IGF及其受体 IGF．IR在肺癌等 制尚未完全明了。目前公认的作用机制 用进展 恶性肿瘤的持续生长和抗凋亡中起着 模型可分为三个阶段_2]。(1)启动阶段： 2．1 RNAi在肺癌研究中的应用 重要作用。Kong等 以质粒pENTRTM／ 导人细胞内的dsRNA被核酸酶 RNase 2．1．1 应用 RNAi逆转肺癌细胞的多 u6为载体 ．与 IGF—IR的DNA模板重 Ⅲ家族中特异识别 dsRNA的Dicer酶 药 耐药 状态 多药耐 药 (mutidmg 组 ，进而转染人A549细胞 。重组质粒 切割成2l一23bp的双链小干扰RNA， resistenee．MDR)是肿瘤细胞对某种抗 表达的siRNA触发RNAi效应．使IGF— 即siRNA(sho~interferingRNA)：其 3 肿瘤药物耐药的同时．对与其结构和作 IR基因沉默。成功抑制A549细胞的 末端有两个非配对核苷酸 ．5末端的第 用靶位不同的其他抗肿瘤药物也产生 生长增殖．明显提高A549细胞对顺铂 一 个核苷酸被磷酸化。siRNA是识别靶 抗药性 的现象 。随着化疗药物顺铂 的敏感性。以上研究表明，RNAi技术作 RNA的标志 ．因此又被称为引导 RNA (CDDP)、卡铂 (CBI)、阿霉素 (ADM)等 为逆转肺癌细胞多药耐药的一种策略 (guideRNA)。siRNA 的生 成启动 了 的广泛应用 。小细胞肺癌 (SCLC)的 具有广阔的应用前景。 RNAi反应，这一过程需消耗 ATP。(2) MDR基因表达不断增加并严重影响化 2．1．2 RNAi用于肺癌相关基因功能研