重组釉原蛋白的提取和纯化.pdfVIP

口腔颌面修复 学杂志 2010年 3月第 11卷第 2期 �����������������������������������2010���.11��.2 �论著� 重组釉原蛋白的提取和纯化 * 孙樱林 冯海兰 黄 薇 �摘要� 目的：通过固相化金属亲和层析的方法，获得较高纯度的具有生物活性的重组釉原蛋 白�方法：将重 TM 组表达质粒 pcDNA3.1/Am/���-His(-)B转染至 HEK293A细胞中，用 G418持续筛选，培养扩增�收集细胞， 加入 RIPA细胞裂解液，粗提蛋 白�通过镍金属螯合层析的方法，纯化 目的蛋 白，并进行 SDS和 Wes�ern blo�检测，检测蛋 白纯化程度和产率�将釉原蛋 白冻干，-80�冻存�结果：SDS及 Wes�ernBlo�检测 结 果表明，蛋 白粗提液中有大小 约 50KDa的重组釉原 蛋 白表达，经过 HisTrapHPcol�mn层析 ， 目的蛋 白形成了 单一条带，纯化率为 91.3%�结论：本实验通过固相化金属亲和层析的方法，获得了高纯度的重组釉原蛋 白，为 进一步研究蛋 白质功能奠定了基础� 关键词：釉原蛋 白；真核表达；蛋 白质纯化 [中国图书分类号]R783.3[文献标识码]A[文章编号]1009-3761(2010)02-0071-04 ������������������������������������������������� �������-���,FE�GH��-���,H�A�G���.(D�������������������������,�������������������������H��������� �����������,B������100081,C����) �A�����������������:Theaimof�hiss��d��as�oob�ainrecombinan�h�manamelogenin�i�hhighp�ri���hro�ghim- mobili�edme�alaffini��chroma�ograph�(IMAC).�������:Therecombinan�e�pressionplasmidpcDNA3.1/Am/TM ���-His(-)B�as�ransferredin�o�heHEK293Ae�kar�oc��ecells.Thecells�erec�l��redselec�i�el��i�hG418.RIPA celll�sis�as�sed�oe��rac�pro�einprimaril�.HisTrapHPcol�mn�as�sed�oe��rac��herecombinan�amelogenin�i�h highp�ri��.ThenSDSandWes�ernBlo��ereperformed�ochecko��p�rifica�iondegreeandefficienc�.A�las�,�he recombinan�amelogenin�asfro�endr�,andkep�in-80�.�������:Abo��50kDaamelogeninpro�ein�ascheckedo��in celll�sisb�SDSandWes�ernBlo�.Thro�ghHisTrapHPcol�mn,�hesinglepro�einband�asobser�ed.Thera�eof p�rifica�ion�as91.3%.����������:In�hise�perimen�IMAC�as�seds�ccessf�ll��oob�ain�herecombinan�amelogenin �i�hhighp�ri��.Thisisabasicresearch�oin�es�iga�ei�sf