新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端促进运动功能恢复实验研究.pdfVIP

l376 · ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery，November2009，Vo1．23，No．11 · 新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端 促进运动功能恢复实验研究 梁洪生 梁鹏 高爱丽 祁权 刘恩重 吴佳宁 徐小平 【摘 要】 目的 研究新型联合基质——BMscs一去上皮细胞羊膜 (denudedhumanamnioticmembrane，DHAM) 桥接大鼠脊髓横断性损伤断端，促进轴突再生及提高后肢运动功能的作用。 方法 取健康产妇正常剖宫产术后 自愿 捐献的羊膜，经联合消化法彻底去除表面上皮细胞制备DHAM，并行HE染色观察。健康4周龄雌性Wistar大鼠4只， 取骨髓行BMSCs分离、培养，取第4代细胞 以PKH26标记后，以l×10s个 ／cm 密度接种于DHAM 上制各联合基质 (BMSCs．DHAM)。倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察BMSCs生长状态。另取8周龄雌性Wistar大 鼠40只， 体重 200～220g，制备T脊髓横断性损伤模型，随机分为4组，每组 l0只。A、C组分别用BMSCs-DHAM 和单纯 DHAM包裹脊髓的2个断端，B、D组分别于脊髓损伤中心注射 10 细胞浓度为l×10个 ／ 的BMSCs和等量生理盐水。 术后 12周采用BBB运动评分检测大鼠后肢运动功能恢复情况，行皮层运动诱发电位 (motionevokedpotential，MEP)测 定；生物素化葡聚糖胺 (biopinylateddextanamine，BDA)顺行示踪检测及神经丝蛋 白200(neurofilamentprotein200， NF．200)免疫荧光染色观察。 结果 HE染色显示联合消化法成功制备DHAM。镜下观察到BMSCs在DHAM 上生 长状态 良好。术后 l2周，A组BBB评分达 (12．504-1．26)分，明显高于其余各组 (尸O．05)。MEP测定显示，A组潜伏 期 (3．52-42．45)ms及波幅 (480．68士l8．41)uV，恢复效果优于其余各组 (尸0．05)。BDA顺行示踪观察示，A组损伤平 面以下BDA通过损伤部位的轴突再生率为54．12％士3．30％，均高于其余各组 (尸0．05)；且A组NF．200免疫荧光染色 亦可见大量再生轴突通过损伤部位。 结论 新型联合基质BMSCs—DHAM一定程度上提高了脊髓横断性损伤大鼠的 后肢运动功能，是一种具有广泛应用前景的基质材料。 【关键词】 组织工程 BMSCs 去上皮细胞羊膜 脊髓损伤 轴突再生 大 鼠 中图分类号：R651．2 R318．08 文献标志码：A A NEW C0MPOSITE MATRlX BRIDGlNG B0THSTUMPSOFSPlNALCORD TRANSECTlON IN RATSTo PROMOTERECOVERYOFMOTORFuNcTION／LNGHongsheng~，LIANGPe ，GAOAilfl,qiQuan，LIUEnzhon~， WUlianin~，XUXietoping~．TheFirstAffiliatedHospimlofHarbinMedicalUniversity,HarbinHeilongfiang,150001，P．R．China； CollegeD，工i~eSciences,NortheastAgriculturalUniversity．Correspondingauthor：LIANGPeng,E—mail：Liangpengd@gmail．com [Abstract] Objective Toinvestigateanewcompositematrix(BMSCsseededonthedenudedhumanamniotic membrane，BMSCs—DHAM)bridgingthebothstumpsofspinalcordinjuryinratstopromoteaxonregenerationandimprove