小鼠胸腺上皮细胞系的细胞学鉴定.pdfVIP

维普资讯 第 21卷 第4期 解 剖 学 报 Vo1．2l。No l 1990 年 1O月 ACTA ANAToM ICA SINICA oct． 1990 ’ ／小鼠胸腺上皮细胞系的细胞学鉴定 吴江声 张兰芬 傅爱华 陈慰峰 (北京医科太学组织学胚胎学教研室，免疫 教研室 ，北京 l0aD83 摘要 本文报道小鼠胸腺上皮细胞系(MTEC系)的细胞学鉴定。细胞为多角形 ，呈上皮样排 列，用抗角蛋白抗体显示细胞胞质内均含角蛋白。电镜观察可见胞质内台成束的张力细丝，相邻细 胞间有桥粒结构。用抗小鼠上皮细胞单克隧抗体进行免疫组织化学染色 ，几乎垒部 MTEC 细胞均 为MTS33阳性，提示 MTEC 细胞是来源于胸 腺髓质的上皮样细胞。大多数 MTEC 细胞有 正常 小鼠染色体数 (40)条 本文结果表 明，MTEC 细胞系属正常小鼠胸腺上皮细胞。 关键词 胸腺 上=皮细胞系 角蛋白 张力细丝 桥粒 免疫组织化学 胸腺微环境对 T细胞的分化、发育和成熟有密切关系。胸腺基质细胞相 连构成网状结 构，胸腺细胞位于网眼内，并与胸腺基质细胞紧密接触 。胸腺基质细胞是组成胸腺微环境的 重要成分，它包括上皮网状细胞、巨噬细胞、树突状细胞、肥大细胞等，其中上皮网状细胞 对 T细胞分化、成熟非常重要 。胸腺基质细胞的原代培养虽提供了其促进 T细胞增殖及 分化的证据，但原代培养物是混台的，包括多种类型的胸腺基质细胞，不能确定各种胸腺基 质细胞的具体功能。近年来胸腺基质细胞的体外建株工作受到重视，因而建株后的细胞学鉴 定 自然十分重要。本文对所建的小鼠胸腺基质细胞系用普通染色、免疫组织化学、染色体数 目、透射电镜方法进行细胞学鉴定，确定其为胸腺上皮细胞 选对在体外培养中研究胸腺上 皮网状细胞的功能提供了重要条件。 材料和方法 一 、 材料 aI6／c小 鼠胸腺上皮细胞系 。 二 ，方法 (一)苏木精一伊红染色，将贴附细胞的盖片置 Bouin液中固定 3O分钟，7O％酒精、蒸 馏水充分洗净，做苏木精一伊红染色 ，按常规方法脱水、透 明和封片。 (二)免疫组织化学染色：1．免疫酶法 PAP法基本按 Sternberger口法进行，将贴附 细胞的盖片，以4 多聚甲醛液固定 30分钟，用PBS液洗 2次，滴 3 H。O。5分钟，以去除内 源性过氧化酶活性。第一抗体用小鼠单克隆抗角蛋白抗体 1：5o(~L京生物制品所肿瘤研究室 制备)，4oc孵育 24小时。然后分别用羊抗 鼠 [gO1：100和 PAP复合物 1：100，在 37。C孵 育 40分钟。最后用DAB加 HzOz的溶液 [用0．05mol／L Tris盐酸缓冲液 (pH7．6)配 成含 0．02 DAB和 0．005％H：O：]显色约 5分钟。 以免去第一抗体作方法对照。2．免疫荧光法 将贴附细胞的盖片，用 PBS液洗后吹干 用纯 甲醇固定 30分钟(一20。C)。再用 PBS洗 。吹 干后分别滴加小 鼠单克隆抗角蛋 白抗体 1：30及大鼠抗小鼠胸腺基质细胞的MTS系列 1、6、 17、33单克隆抗 体 (R．L．Boyd博土赠，荧光显示部位：1．被膜下和髓质；6．皮质和髓质； 17．皮质；33．髓质)置 37。C中30分钟，取出所 以PBS(pH 7．4)冲洗，再入蒸馏水浸泡 1～2 维普资讯 4期 吴江声等．小鼠胸腺上皮细胞系的细胞学鉴定 分钟，取出吹千，分别滴加荧光素标记羊抗 鼠IgG抗体(SilenusLaboratories，Australia) 及小鼠抗大鼠IgG抗体 (北京市肿瘤防治研究所)置 37。C中30分钟，冲洗吹干，缓冲甘油封 固。方法对照为不加第一抗体 。 (三)透射 电镜样 品制备 ：培养细胞用细胞刮匙刮下 ，离心 ，沉淀成团块 ，固定于 3％戊 二醛固定液 (0．1mol／L磷酸缓冲液，pH7．2)中2