螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及TGF-β1、FN分泌的影响.pdfVIP

山东医药2011年第 51卷第 37期 · 基础研 究 · 螺 内酯对高糖培养大 鼠肾小球系膜细胞增殖 及 TGF—I3l、FN分泌的影响 郭晓理 ，朱隽雅 ，施 辉 ，王德琴 ，徐美玉 (1南通大学附属医院，江苏南通226001；2海安县人民医院) 摘要：目的 探讨螺内酯对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞 (GMCs)增殖的抑制作用及转化生长因子 B。(TGF． p。)、纤维黏连蛋白(FN)分泌的影响。方法 将大鼠GMCs置于低糖、高糖及高糖+不同浓度螺内酯中传代培养， 并以此分组。采用噻唑蓝法检测各组大鼠GMCs增殖情况，采用ELISA法检测各组TGF—B。、FN分泌情况。结果 高糖培养组大鼠GMCs增殖明显高于低糖培养组 (P0．05)。加入螺内酯后，GMCs增殖受到抑制，与低糖、高糖组 比较P0．05或0．叭，且随着螺内酯剂量增加细胞增殖抑制递增。螺内酯可明显减少TGF．B、FN的分泌 (P 0，05或0．01)，并随浓度增高、时间延长抑制作用增强。结论 高糖能刺激大鼠GMCs增殖；螺内酯能抑制大鼠 GMCs增殖，并可抑制TGF—p、FN分泌。 关键词：大鼠；螺内酯 ；。肾小球系膜细胞；转化生长因子p；纤维黏连蛋白 中图分类号：R587．1 文献标志码：B 文章编号：1002-266X(2011)37-0028-02 糖尿病肾病 (DN)是糖尿病(DM)常见并发症， 5％CO 孵箱中培养。2～3d传代 1次。取对数生 其主要的病理改变是肾小球系膜细胞 (GMCs)增殖 长期GMCs用于实验。分组：①低糖 (5．5mmol／L) 及异常增多，细胞外基质 (ECM)过度沉积。转化生 对照组 (LG组)；②高糖 (25mmoL／L)对照组 (HG 长因子p。(TGF—B)是其病理改变的主要介导物，不 组)；~sPn组(HG+0．25Ixmol／L螺内酯)；~sPi2 仅可上调ECM蛋 白表达，还可降低ECM蛋 白降解 组 (HG+2．5Ixmol／L螺内酯)；⑤SPI3组 (HG+25 酶的活性。ECM 的主要成分是 FN，FN增多是ECM Ixmol／L螺 内酯)；⑥SPI4组 (HG+50~mol／L螺 内 过度沉积的标志。2009年9月 ～2010年 3月，本研 酯)。每组设6个复孔。 究观察了高糖刺激对大鼠GMCs增殖的影响，并进 1．2．2 螺 内酯对大 鼠GMCs增殖的影响 采用 一 步观察了螺 内酯干预后对大 鼠GMCs增殖及 MTT法。调整细胞密度至 1×10个／ml，将 GMCs TGF—p、FN分泌的影响。现报告如下。 接种于96孔板，每孔200Ixl。分别培养 l2、24、48 1 材料与方法 h，于培养结束前4h加入 20 l的MTr溶液，37℃ 1．1 材料 大 鼠GMCs购 自上海长征医院肾内科。 继续孵育4h弃上清，加入 150 I的DMSO振荡。 低糖、高糖 DMEM培养液，青—链霉素组合双抗为 用酶标仪(波长490nm)测定 OD值。 Gibeo公司产品。胎牛血清为杭州 四季青公司产 1．2．3 TGF-p】、FN的检测 采用 ELISA法。调整 品。0．25％胰蛋白酶，24孔、96孔培养板为碧云天 细胞密度至 2×10 个／ml，将 GMCs接种于 24孔 公司产品。螺 内酯、二 甲基亚砜 (DMSO)为 Sigma 板，每孔 1000 l。培养24h后，检测不同浓度螺内 公司产品。噻唑蓝 (Myr)为 Amreseo产品，ELISA 酯作用后 TGF．B、FN的含量。并检测 25~mol／L 试剂盒由博士德提供。ThermoMK3酶标仪为美国 螺 内酯作用 l2、24、48h时TGF—B、FN的含量 。操 赛默飞世尔科技公司生产。 作过程严格按ELISA试剂盒操作说明进行。 1．2 方法 1．3 统