肺孢子虫（菌）p55抗原嵌合基因的克隆及表达产物分析.pdfVIP

中国人兽共患病学报 774 ChineseJourna1ofZoonoses 2O11，27 (9) 文章编号：1002—2694(2011)09—0774—04 肺孢子虫(菌)p55抗原嵌合基因的克隆 及表达产物分析* 王雪莲 ，栾和芝 ，刘 彤。，赵雨杰 ，安春丽 摘 要 ：目的 构建肺孢子虫(菌)p55蛋 白嵌合基 因的原核表达载体 ，分析、鉴定及纯化表达产物。方法 自NCBI网站 的蛋 白数据库 中获取 p55抗原及 4个变异体信息，运用生物信息学方法预测可能的抗原表位 ，设计包含多个可能抗原表位 的 多肽 ，根据遗传 中心法则及大肠杆菌密码子偏好性进行密码子优化 ，将氨基酸序列转化为核苷酸序列，将人工合成 的嵌合基 因(CAG)片段连接到质粒 pGEX-6p一1(含 GST标签)上 ，构建原核表达载体 pGEX一6p一1／cAG，酶切 、测序鉴定 。pGEX-6p一1／ CAG转化大肠杆菌，异丙基一I?-D硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导表达重组融合蛋 白CAG-GST。表达产物用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶 电泳(SDS—PAGE)及 Western-blotting分析鉴定 。结果 双酶切及测序结果显示重组质粒 pGEX-6p一1／CAG构建成功。SDS- PAGE显示重组融合蛋 白相对分子量约为69000。Western-blotting结果显示，表达的融合蛋 白为CAG-GST。结论 成功构 建表达 p55蛋 白嵌合基 因的原核表达载体 pGEX一6p-1／CAG，建立表达重组蛋 白的原核表达系统 。 关键词 ：肺孢子菌；p55蛋 白；嵌合基 因；重组融合蛋 白 中图分类号 ：R382．3 文献标识码 ：A Cloningofchimericgeneofp55antigenfrom Pneumocystis andanalysison theexpression Product WANGXue—lian，LUAN He—zhi，LIU Tong，ZHAOYu—jie，ANChun—li (DepartmentofMedicalMicrobiologyandParasitoly，CollegeofBasicMedicalSciences， ChinaM edicalUniversity，Shenyang 110001，China) ABSTRACT：Toconstructtheprokaryoticexpressionvectorofchimericgeneofp55antigenfrom PneumocystisandtOana— lyzeandidentifytheexpressionproduct。thepossibleepitopesofp55proteinanditsvariantswereforecastedbythebioinforma— ticstechnologyandapolypeptidecontainingmuhiplepossibleepitopeswasdesigned．Theaminoacidsequencesofthepolypep— tidewereconvertedtOthenucleotidesequencesaccordingtOthegeneticcenterrulerandthecodonpreferenceofE．colitOmake thecodonoptimization．Thechimericgene(CAG)fragmentwassynthesizedandinsertedintotheplasmidpGEX一6p一1 (contai— ningglutathioneS-transferase；GST)tOconstructtherecombinantplasmid．Theexpressionoftherecombinantprotein inE． coliwasinducedbyIPTG．Therecombinantproteinwasanalysizedandi