箭筈豌豆AGAMOUS同源基因及其启动子的克隆和分析.pdfVIP

作物学报 ACTA AGRONOMICA SINICA 2011，37(10)：1735—1742 http：／／www．chinacrops．org／zwxb／ ISSN O496—3490；CODEN TSHPA9 E—mail：xbzw@chinajourna1．net．cn DoI：10．3724／SP．J．1006．2011．01735 箭箸豌豆AGAMOUS同源基因及其启动子的克隆和分析 张 磊 刘志鹏 王彦荣 兰州大学草地农业科技学院 ，草地农业系统国家重点实验室，甘肃兰州 730020 摘 要：AGAMOUS(AG)是参与植物雌蕊和雄蕊发育调控的最重要花器官同源基因之一 。通过TAIL—PCR、RACE和 RT-PCR技术相结合，获得了箭管豌豆花器官同源基因VsAG(VsAGAMOUS)及其上游调控序列。该基因DNA序列总 长 3158bp，CDS区域735bp，编码含有 244个氨基酸残基的蛋 白产物 。序列在氨基酸水平上与近缘植物豌豆PsAG 基因序列一致性达 98％，与拟南芥AtAG基因一致性为 68％。将该基因在 GenBank上注册，登录号为 JF313850。生 物信息学分析表 明，VsAG基因第2内含子区域含有丰富的转录调控元件，在种类和功能分化上与基因上游调控序列 表现出相似特征 。这一结果暗示了第 2内含子对豆科植物AG基因表达调控的重要作用，并为通过基因工程方法创造 箭管豌豆优 良育种材料奠定了基础 。 关键词：AGAM0US(AG)基 因；箭管豌豆；启动子克隆；TAIL—PCR IsolationandAnalysisofAGAM OUSHomologousGeneandItsPromoterfrom Ⅵ ／asativaL． ZHANG Lei，LIU Zhi．Peng，andW ANG Yan—Rong SchoolofPastoralAgricultureScienceandTechnology／StateKeyLaboratoryofGrasslandFarmingSystem，LanzhouUniversity，Lna zhou730020 China Abstract：Commonvetch (ViciasativaL．)isconsideredtobeanidealliquidityspringproteidforageforTibetstockbreeding． However,littlehasbeenknownaboutthemolecularmechanism offloralorganformationandsubsequentseeddevelopmentproc- essduringdomesticationofcommonvetchinalpinesteppe．AGAM0US(AG geneisoneofthemostimportantfloralhomologous genesinvolvedinplnatstamenandgynoecium development．Inthisstudy，anAG homologuegeneanditsupstrema regulation sequencewereisolatedfrom ViciasativaL．usinghiTAIL—PCR．RACE．nadRT_PCR．Theresultsshowedthatthisgenewas3158 bDinDNA sequence，COdingaproteinproductof244animoacides．Homological analysisshowedthatthesimilaritybetweenhtis sequencena dPisum sativum 4G genewasover98％ innaimoacidleve1．Therefore，thesequencewasconsideredtobeVicia sativaAG gene．Itwasnamed GwiththeaccessionnumberJF313850 inGenBank．Byanalysingthecis—elementsexistingin upstream promoterregionandthesecondintron．hteresultsshowed G secondintronregionsharedsomesimilra cis—elements withpromoterregion．It