吉林省部分地区猪源大肠杆菌磺胺耐药基因Sul2的分布研究.pdfVIP

《江西畜牧兽医杂~}2oo8年第6期 实·验研究 · 文章编号：1004—2342(2008)06—0008—03 中图分类号：$859．79*6 文献标识码：B 吉林省部分地区猪 大肠杆菌磺胺耐药基因Sul2的分布研究 陈绍辉，林雁春，曹海涛，马红霞 (吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118) 摘 要：对吉林省部分地 区分离的20株猪源大肠杆菌进行药物敏感性检测的结果表明：20株猪源大肠杆茵对磺胺类药 物均耐药：耐药茵株的质粒检 出率达10o％。应用Sul2基因的特异性引物，以检 出的质粒为模板 ，均成功地扩增 出特异性 目的条带。随机抽取3株猪源大肠杆菌的 目的片断 ，克隆、测序的结果表 明：3株猪源大肠杆菌的质粒上均含有磺胺耐药 Sul2基 因，且基因序列与文献报道相一致。含Sul2基 因的质粒在吉林省部分地区分离的2O株猪源大肠杆菌中广泛存在 ， 且在吉林省部分地 区猪 源大肠杆茵对磺胺类 药物的耐 药性方面起到较为重要的作 用。 关键词 ：大肠杆菌；磺胺耐药 ：Sul2基 因 自1935年磺胺类药物进入 临床应用 以来 ，已 1 材料与方法 广泛用于细菌感染性及原虫感染性疾病的治疗 ，部 1．1菌株 分磺胺类药物在治疗大肠杆菌病中曾发挥 了重要 20株临床分离的致病性大肠杆菌 ：分别采 自延 作用 l】【，但随着该类抗菌药物的广泛、持续及不当使 边 、四平、通化 、长春东南部地区的临床表现为典型 用 ，对磺胺类药物耐药的菌株不断增多。耐药性不断 大肠杆菌病 的猪心 、血 、脾及肠道 ，经形态学 、生化 增强，特别是大肠杆菌对磺胺类药物 已表现 出极高 反应鉴定为埃希氏大肠杆菌。大肠杆菌标准质控株 的耐药性12,31。目前 ，大肠杆菌对磺胺类药物耐药的机 (ATCC25922)，购 自中国科学院微生物所。 制已基本阐明。SulR基因特别是 Sul2基因在大肠杆 1．2药品及试剂 菌对磺胺类药物耐药性方面具有重要作用4[1．Sul2基 庆大霉素 、诺氟沙星 、强力霉素 以及氟苯尼考均 因在猪源 、禽源 、人源大肠杆菌中广泛存在 5J【．但对 为标准品，购 自中国兽医药品监察所 ；新诺明(纯度 于 Sul2基因地域性分布研究的报导并不多见。本论 为70％)．由北京海洋医化生物科技有限公司提供。 文拟对 吉林省部分地 区猪源致病性大肠杆菌进行 胰化蛋白胨粉、酵母粉、琼脂粉、十二烷基磺酸钠 耐药性监测的基础上，评价吉林省部分地区猪源大 (SDS)、乙二胺四乙酸钠、胰 RNA酶 、dNTPs、溴化 乙 肠杆菌对磺胺类药物的耐药水平以及 Sul2基 因在 锭 (EB)和琼脂糖 ，购 自北京鼎国生物技术有限责任 上述菌株中的分布状况 ，为合理选择猪大肠杆菌病 公 司 ；～DNM所nd IIIDNA Marker、DL2000DNA— 治疗药物提供依据 ．为研究临床大肠杆菌的耐药机 Marker、Taq(Mg2~plus)聚合酶 、ExTaq(MgZ+plus)聚合 制以及防止耐药性的进一步传播提供参考。 酶 、限制性内切酶EeoRI及埘ndIII、PMD18-T载体 和三羟 甲基氨基 甲烷 (Tris)，购 自TaKaRa公司；PCR 以劳务形式 向畜牧业合作经济组织进行投资 产物凝胶回收纯化试剂盒购 自杭州维特洁公司。 时，按当地劳务价格标准 ，借记 “在建工程”等账户 ， 1．3药敏实验 贷记 “资本”账户 。 参照文献[61所述琼脂二倍稀释法进行 ，大肠杆 2．5无形资