广金钱草根瘤菌抗逆性和遗传多样性分析.pdfVIP

华南师范大学学报 （自然科学版） ２０１３年１月 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＳＯＵＴＨＣＨＩＮＡＮＯＲＭＡＬＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ 第４５卷第１期 　　　　　　　　　　　　 Ｊａｎ．２０１３ 　　　　　　　　　　　 （ＮＡＴＵＲＡＬＳＣＩＥＮＣＥＥＤＩＴＩＯＮ） 　Ｖｏｌ．４５　Ｎｏ．１ 文章编号：１０００－５４６３（２０１３）０１－００７３－０６ 广金钱草根瘤菌抗逆性和遗传多样性分析  谷　峻 ，张静苗，张碧瑶，马杏贤，李良冰，吴燕玲 （华南师范大学生命科学学院，广东广州５１０６３１） 摘要：分析了１４株广金钱草根瘤菌对不同盐度、温度、酸碱度和重金属耐受性，并采用ＢＯＸ－ＰＣＲ指纹图谱和ｒｅｃＡ 基因序列分析技术分析其遗传多样性．结果表明，供试菌株对不同盐度和酸碱度表现出相似的耐受性；对不同温度 和不同种类的重金属则表现出不同的耐受性，其中４株供试菌株能够耐受４℃的低温．几乎所有供试的广金钱草根 ２＋ ２＋ 瘤菌都能够在含有４ｍｍｏｌ／Ｌ的Ｚｎ 、Ｐｂ 和含锌、铅双盐的ＹＭＡ平板上生长，而仅有２株供试菌株能够在添加 ２＋ ４ｍｍｏｌ／ＬＣｕ 的ＹＭＡ平板上生长．ＢＯＸ－ＰＣＲ指纹图谱分析表明，与广金钱草共生的根瘤菌在基因组水平上与已 知的埃氏慢生根瘤菌相似，代表菌株的ｒｅｃＡ基因序列的系统发育分析与ＢＯＸ－ＰＣＲ聚类结果基本一致，供试的广金 钱草根瘤菌除１株位于根瘤菌属外，其余根瘤菌均为慢生根瘤菌属． 关键词：广金钱草根瘤菌；抗逆性；遗传多样性 中图分类号：Ｑ９３９　　　文献标志码：Ａ　　　ｄｏｉ：１０．６０５４／ｊ．ｊｓｃｎｕｎ．２０１２．１２．０１４ 　　广金钱草（Ｄｅｓｍｏｄｉｕｍｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉｕｍ）是豆科植物 定的基于基因组水平的指纹图谱分析手段，它是根 山蚂蝗属中的一种，其干燥地上部分为常用传统中 据广泛存在于细菌基因组中的短重复序列（ＢＯＸ） ［１］ 的保守性来设计引物并扩增位于重复序列间的不同 药，收载于中华人民共和国药典 ，其味甘、性凉、 具有清热和利尿的功效，可用于治疗泌尿系统感染、 片段，近年来被广泛地用于高效根瘤菌菌株的田间 尿路结石和胆石症等．广金钱草主产于广东、广西、 筛选标记［６－８］．获得的结果能进一步明确广金钱草 ［１］ 海南等地 ．近些年随着其疗效被确认，对广金钱 根瘤菌的系统发育地位和遗传多样性，本研究选取 草需求量逐年增加，使得其野生资源不断减少．也是 代表菌株测定了其ｒｅｃＡ基因序列并进行系统发育分 目前中药材生产的主要方法．随着广金钱草的连年 析．为进一步筛选与广金钱草共生的高效固氮体系， ［２］ 提高广金钱草的产量和品质提供优良的种质资源． 种植，病害发生日益严重 ．迄今为止，国际上对重 要的土传病害还没有十分有效的防治方法，然而伴 随着土壤微生物分子生态学技术的发展，研究者提 １　材料与方法 出利用土壤中的有益微生物种群与有害微生物的竞 争、拮抗、捕食等生态学关系，使有益微生物类群占 １．１　主要试剂及仪器 据有利的生态位，可能是控制土传病害的有效途 ＰＣＲ试剂及转化试剂均购自大连宝生物公司， 径［３－５］．根瘤菌作为与豆科植物共生的一类有益微 Ａｘｙｇｅｎ凝胶回收试剂盒和ＤＮＡ提取试剂盒分别购 生物类群，一旦与宿主建立共生体后，能够为宿主提 自谊桥生物科技公司及美津生物科技有限公司（广 供生长必需的氮素营养，增加宿主的抗逆性．然而目 州）．ＰＴＣ１００ＰＣＲ扩增仪（ＭＪＲｅｓｅａｒｃｈ公司，美 前国内外对广金钱草根瘤菌的研究还未见报道． 国），高