不同一抗孵育方法对免疫组化染色效果的对比研究.pdfVIP

陕西医学杂志 2011年 1O月第 40卷第 1O期 1291 8l3． ratsrJ]．AmJPhysiol，2004，287：H216-H224． [2] HaefligerJA，MedaP．Chronichypertensionaltersthe [4] RummeryNM，MckenzieKu，WhitworthJA，eta1． expressionofCx43incardiovascularmusclecells[J]． Decreasedendothelialsizeandconnexinexpressioninrat BrazJM edBiolRes，2000，33(4)：431-438． caudalarteries during hypertension[J]．Hypertens， [3] KansuiY，FujiiK，NakamuraK，eta1．AngiotensinII 2002，2O：247—253． receptor blockade corrects altered expression of gap (收稿 ：2011-04—01) junctioninvascularendothelialcellsrfom hypertensive 不同一抗孵育方法对免疫组化染色效果的对 比研究 第 四军医大学唐都医院 (西安 710038) 兰 淼 李艳红 朱少君 巩 丽 刘小艳 任 拼 姚 丽 张 伟 摘 要 目的：探讨不 同的一抗孵育方法对 CD2O、S一10O、C—erbB2、P53抗体免疫组化染色 效果的影响 。方法 ：12O张免疫组化 阳性对 照片，采用EliVision二步法分别滴加对应的抗体 CD2O、S一1OO、C—erbB2、P53，采用 37℃烤箱孵育 1h，室温孵育 3h，4℃冰箱过夜三种方法进行一 抗孵育，免疫组化染色完成后分别由两位病理 医师行独立看片，并进行染色效果对比。结果：一抗 37℃烤箱孵育 1h，阳性细胞染色强度最强，但 阳性细胞数量少，背景着色重；一抗室温孵育3h，阳 性细胞染色强度及数量好，背景清晰；一抗 4℃冰箱孵育过夜 ，阳性细胞染色强度及数量好 ，有少 量背景着色。结论 ：不同的一抗孵育方法对CD20、S—100、C—erbB2、P53抗体表达的阳性数量强度 及免疫组化染色背景存在影响，一抗室温孵育3h染色效果最佳 ，孵育时间较短 ，有利于临床病理 报告的发 出，值得推广 。 主题词 免疫组织化学 抗体亲和力 @一抗孵育 【中图分类号1 R446．61 【文献标识码】 A 【文章编号】 免疫组织化学技术作为病理诊断的辅助技术 ，已 均分放在 A，B，C三组 内，本实验共有 4例抗体 阳性 成为 目前临床病理诊断不可或缺 的重要手段口]。在众 片 ，每组共计 30张 ，同时做好标记。②6OhC烤箱烤片 多影响免疫组化结果的因素 中，抗体孵育温度和时间 2h，常规脱蜡至水 ，3 双氧水 甲醇液室温作用 20min 对反应体系 的影响是最关键 的因素之一[2]，寻找适宜 后蒸馏水洗 2次，所有切 片采用 pH 6．0的柠檬酸缓 的孵育方法，以达到最佳的染色强度和最清晰的背景 冲液微波修复 15min。分别滴加相应的抗体 CD20、S一 是每位从事免疫组化的实验技术人员所面临的实际问 100、C—erbB2、P53。A组切片采取 37℃烤箱行抗体孵 题 。为此 ，我们对 4种抗体在不同温度不 同时间的孵育 育，时间为 lh；B组切片采取 23℃室温行抗体孵育，时 效果进行了对 比研究，以期找到免疫组化一抗孵育的 间为 3h；C组切片采取 4℃冰箱行抗体孵育，时间为过 最佳方法 。 夜 。③抗体孵育完成后 ，分