豫南黑猪心脏cDNA文库的构建与鉴定.pdfVIP

畜牧与饲料科学 AnimalHusbandryandFeedScience 2010，31(5)：1-2 豫南黑猪心脏 cDNA文库的构建与鉴定 易朝辉 (信 阳职业技术学院，河南 信 阳 464000) 摘要：以豫南黑猪心脏为供试材料 ，采用改进的异硫氰酸胍法提取心脏总RNA。通过 SMART技术反转录合成全长 cDNA．经LD—PCR扩增后 与pMD18一T载体连接并转化细菌DH5cL，测定滴度和重组率，构建成豫 南黑猪 心脏全长 cDNA文库。经初 步检测 ．原始文库的滴度为 1．8x10cfu／mL，重组率约为 94．4％。从原始文库随机挑取 l3个单茵落过夜 培养，提取质粒 ，经HindⅢ和Ec I双酶切 ，凝胶 电泳显示插入 片段大小在0．3~2．0kb之 间。 关键词 ：豫南黑猪 ；心脏 eDNA文库 ；SMART技术 中图分类号 ：$828．891 文献标识码 ：A 文章顺序编号 ：1672—5190(2010)05—0001—02 ConstructionandIdentificationofcDNALibraryofHeartTissuefrom YunanPig ／ YIZhao—hui (XinyangVocationalandTechnicalCollege，Xinyang 464000，China) Abstract：ThetotalRNA from hearttissueofYunanpigwasextractedbyisothioeyanatemethodinhtetria1．Firstly，fulJ—lengthcDNAswere synthesizedbySMARTtechnique．thenapoolofdouble—strandedeDNAwasamplifiedbyLD-PCRtechnology．TheachivedeDNAfragmentswas ligatedintopMD18一Tvectorand~ansformedintoE colDH50【toconstructthefull—lengtheDNAlibrary．I’helibrarywastittered，andtherateof recombination(blue／white)wasalsodetermined．TheresultsshowedthattheprimarytiteroftheconstructedeDNAlibrarywas1．8×l∥cuf／mL．the recombinationratewasabout94．4％．13transformedgermswereselcetedandcultured．tllentheirplamidswereextractedandidentifiedby restrictionenzymeofHindⅢandEcoRI。thegelelectrophoresisshowedthelengthofmosteDNAinsertedinthelibrarywasabout0．3—2．0kb． Keywords：Yunanpig；hearttissuecDNAlibrary；SMARTtechnique 豫南黑猪是河南省著名的地方猪种 ，是我国地方种猪 国产分析纯。宿主菌 E．coliDH5c~由遗传实验室保存。 的宝贵基因库 ，1982年收录 《中国猪品种志》。豫南黑猪也 1．1．3 仪器及设备 ：一70℃超低温冷冻冰箱 (美国)；Biofuge 是历史上经长期 自然选择与人工选择 ，又经过多年选育形 PrimoR台式高速冷冻离心机 (ThermoScientific)、ABI2720 成的一个优 良地方猪种，是我 国中原地带优 良地方猪种，具 型 PCR扩增仪 、Tanon一2500型凝胶成像分析系统 、Tu一1901 有适应性强 、繁殖力高、肉质