隐匿性HBV感染者血清中HBVS基因变异分析.pdfVIP

山西医科大学学报 (JShanxi 生 ! 壑 (! ·781· 隐匿性HBV感染者血清中HBVS基因变异分析 张玲荣， 马 媛 ， 郝彦琴， 朱新宇 (山西医科大学第一临床医学院感染病科，太原 030001； 通讯作者， E．mail：zxy6608056@163．corn) 摘要 ： 目的 分析隐匿性HBV感染者的HBVDNA基因序列，查找基因变异位点，探讨隐匿性 HB~感染的分子生物学机 制。 方法 选择不明原因肝病患者76例，分离患者血清，采用巢式PCR检测患者血清 HBVDNA，阳性者随机抽取8例扩 增 nt56一nt767HBVS区DNA片段并采用直接测序法检测S区基因的变异情况。 结果 本组76例不明原因肝病患者中16 例血清 HBVDNA阳性，随机选择8例测序比对发现，a决定簇内nt587出现 G—A的突变，推导氨基酸由甘氨酸变异为精氨 酸，即较为常见的G145R突变。a决定簇外nt355、nt484碱基均由A—C，推导氨基酸无变化，nt512碱基由c—A，推导氨基酸 由脯氨酸变异为苏氨酸。 结论 HBVS区的变异影响了体内HBV清除，导致病毒的低水平复制 ，其中G145R突变是隐匿 性 HBV感染发生的原因之一。 关键词： 乙型肝炎病毒； 隐匿性感染； 基因变异 中图分类号： R512．32 文献标志码： A 文章编号： 1007—6611(2011)10—0781—03 DOI：10．3969／J．ISSN．1007—6611．2011．10．002 隐匿性乙型肝炎病毒感染 (occultHBVinfec— (上海)有限公司产品，PTC一100型 PCR扩增仪为美 tion，OBI)是 HBV感染的特殊形式，是临床和流行 国MJ公司产品。 病学的一大难题，影响对 HBV的诊断，导致临床漏 1．3 引物设计与合成 选择HBV基因组中保守的 检及献血员筛检错误，可造成HBV传播，并与肝硬 S区。外 侧 引物 ：上 游 引物 5 一CCTGCTGGTG— 化、肝癌相关。目前隐匿性HBV感染的机制尚不清 GCTCCAGTrC一3，下游引物 5 一ATACCCAAAGA- 楚。本文对不明原因的肝病患者血清标本进行巢式 CAAAAGAAAA一3；内侧 引物 ：上游 引物 5 一 PCR扩增，对扩增的HBVS基因进行序列分析，旨 GCGGG唧 CTYGTIGAC一3，下游引物 5 一GG． 在从基因变异角度分析 HBV隐匿性感染的分子机 GACTcAAGATGrrI1GrACA一3；产物条带为564bp。 制。 1．4 病毒核酸的提取与扩增 患者及阳性对照血 1 材料与方法 清均采用柱吸附法提取 HBVDNA，应用巢式 PCR 1．1 病例选择及血清收集 76例均为 2010—07— 方法扩增 nt56一nt767HBVS区DNA片段，严格按 2011—03在山西医科大学第一临床医学院因不明 照试剂盒说明书进行操作。 原因肝病住院的患者，其 中男性 47例，女性 29例， 1．5 基因测序 从血清HBVDNA阳性者中随机 年龄 32—69岁，平均年龄(48．22±16．33)岁；病程 抽取8例测序，测序范围为HBVS基因序列nt56一 1—9年；其中慢性肝炎31例，肝硬化4l例，肝癌4 nt767，包括 aa决定簇 (124—147aa，nt524一nt595)， 例。人选患者包括血清乙肝病毒表面标志物 (HB． 测序工作 由大连宝生物公司完成。 VM)均阴性和单个或者多个抗体阳性者。所有患 2 结果 者排除其他病毒性肝炎、自身免疫性肝病 、酒精性肝 不明原因肝病患者血清 HBVDNAS区扩增结 病、药物性肝病及代谢性肝病等。收集 10例 HBV 果见图1，目的条带位于 500bp一700bp之间。76 DNA载量为 10。copy／ml乙肝患者为阳性对照。 例不明原因肝病患者中l6例血清HBVDNA阳性， 清晨空腹采肘静脉血 3ml，300