RANKL和M-CSF诱导THP-1细胞向破骨细胞样细胞分化的研究.pdfVIP

山东医药2011年第51卷第 33期 RANKL和 M—CSF诱导THP一1细胞 向破骨 细胞样细胞分化的研究 刘天云 (天津医科大学口腔医院，天津300070) 摘要：目的 探讨建立有效诱导THP-1细胞分化为破骨细胞样细胞的方法。方法 THP一1细胞首先在TPA的 刺激下分化为贴壁细胞，然后在破骨细胞生成因子(RANKL)和巨噬细胞集落刺激因子(M—CSF)的联合诱导下向破 骨细胞样细胞分化。通过抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色检测分化来的细胞是否为破骨细胞样细胞。结果 THP．1在RANKL和M—CSF的作用下分化为TRAP阳性的破骨细胞样细胞。结论 RANKL和M—CSF可联合诱导 THP一1细胞分化为破骨细胞样细胞。 关键词：THP一1；破骨细胞生成因子；巨噬细胞集落刺激因子；破骨细胞样细胞 中图分类号：R329．2 文献标志码：A 文章编号 ：1002-266X(2011)33-0019-03 DifferentiationofTHP-1cellsjntoosteoclast-likecellsjnducedbyRANKLandM—CSF uU Tian．yun (StomatologicalHospitalof死 nMedicalUniversity，Tianjin300070，P．R．China) Abstract：Objective ToestablishamethodthatcaninduceTHP一1cellstodifferentiateintoosteoclast—likecellseffi- ciently．M ethods Firstly，THP一1cellswasinducedtodifferentiateintoadherentcellsbyTPA ，thendifferentiatedintoOS— teoclast—likecellsinducedbyRANKLandM—CSF．Lastly．Usingtartrate—resistantacidph0sphatase(TRAP)methodtode— terminewhetherthemuhinuclear—cellswereosteoclast．1ikecellornot．Reslllts THP一1cellcoulddifferentiateintoosteo— clast—likecellsunderthestimulationofRANKLandM—CSF．Conclusions TheexpressionlevelofRANK inTHP一1cells ishighenoughforittoresponsetoRANKL．THP一1cellscandifferentiateintoosteoclast—likecellsinducedbyRANKLand M—CSF． Keywords：THP一1；RANK ；M—CSF；Osteoclast—likecell 很多骨骼疾病是由破骨细胞的分化和功能异常 制了对破骨细胞的研究。因此，最理想的单核细胞 引起的，如巨颌症、类风湿性关节炎、女性绝经后骨 来源还是能够无限增殖的单核细胞系。因为THP一1 质疏松等。因此，对破骨细胞分化和功能的研究成 中可以检测到RANKL受体 mRNA_6，故我们尝试 为攻克这些疾病的关键。破骨细胞 由单核细胞分化 用RANKL和M．CSF直接诱导 THP一1，看是否可以 而来，在体外实验中，多采用外周血单核细胞 (PB． 得到更接近天然的破骨细胞。 MCs)、脐带血单核细胞 (UBMCs)和人类 白血病单 1 材料与方法 核细胞系U937和THP一1为前体细胞诱导得到破骨 1．1 材料 细胞因子 RANKL和 M—CSF购于美 国 细胞样细胞。破骨细胞分化需要两个细胞因子—— Pepeotech公司，PMA购于美 国Sigma公司，培养基 破骨细胞生成因子 (RANKL)和巨噬细胞集落刺激 RPMI粉末来 自GIBCO公司，胎牛血清购于美 国 因子(M—CSF) 。PBMCs和UBMCs直接在RANKL HyClone公司，抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)