与肝癌细胞系HepG2特异性结合单链抗体的筛选与序列分析.pdfVIP

余　冰等　与肝癌细胞系 Hep G2 特异性结合单链抗体的筛选与序列分析　第 3 期 1·79 · ·肿瘤免疫学· 与肝癌细胞系 HepG2 特异性结合单链抗体的筛选与序列分析① ② 余 　冰 　倪 　明 　雷 　萍 　李文涵 　朱慧芬 　张 　悦 　唐珍洁 　程 　欣 　沈关心 (华中科技大学同济医学院免疫学系 ,武汉 430030) 　　中国图书分类号 　R733 　　文献标识码 　A 　　文章编号 　1000484X( 2005) [摘 　要] 　目的 :从人源噬菌体抗体库中筛选与肝癌细胞系 HepG2 特异性结合的单链抗体 ,为寻找肝癌细胞表面特异性 标志及靶向研究奠定基础。方法 : 以正常肝细胞系L02 为阴性筛选细胞 , 以肝癌细胞系HepG2 为阳性筛选靶细胞 ,从人源噬菌 ( ) 体抗体库 Griffin. 1 Library 经三轮筛选后 ,阳性菌质粒PCR 确定其中含有单链抗体基因的克隆 ,通过细胞 ELISA 及 FCM 筛选特 异性的单链抗体噬菌体 ,通过 ABI3730 全自动荧光测序仪测序 ,并通过 GeneBank 比对进行同源性分析 ,IPTG 诱导可溶性单链 抗体表达 ,并检测其与肝癌细胞株结合的特异性。结果 :获得了 2 个特异性较高的阳性噬菌体单个克隆。经 DNA 测序后 , 在 Genebank 中与人的免疫球蛋白库进行比对 ,并用 IMGTVQuest 软件进行分析 ,确定为 2 个插入序列不同的单链抗体片段。经 细胞 ELISA 证明其阳性克隆菌培养上清可与肝癌细胞株特异性结合。获得的序列成功登陆 Genebank ,序列号为 AY686498 AY686499 。结论 :从人源噬菌体抗体库中筛选到与肝癌细胞系 HepG2 特异性结合的具有功能活性的单链抗体 ,为进一步寻找 肝癌细胞表面特异性抗原及靶向研究奠定了基础。 [ 关键词] 　人源噬菌体抗体库 ;单链抗体 ; 阴性筛选; 阳性筛选;生物淘洗 Identification and sequence analysis of scFvs binding specifically to HepG2 YU Bing , NI Ming , L EI Ping , LI WenHan , ZHU HuiFen , ZHANG Yue , TANG ZhenJie , CHENG Xin , SHEN GuanXin . Department of Immunology , Tongji Hospital , Tongji Medical College , Huazhong University of Science and Technology , Wuhan 430030 , China [Abstract ] 　Objective : To identify the specific antibodies binding to HepG2 by biopanning from a large human naive scFv phage li brary. To find a potential direct and broadly applicable route to identify human antibodies suitable for antitumor therapy study.Methods :A large human naive scFv phage library was used to search for specific targets by biopanning with hepatocellular carcinomas cell line , HepG2 , and counterselecting with a liver cell line , L02. After three rounds of biopanning , single clones bound selectively to HepG2 cells. PCR was carried out for identification of the positive clones which combin