脾虚证大鼠胃肠道VipYNnNos神经元共存.pdfVIP

1．2．1NBT~HPV-6000两步法 少见 ，这与 以往报道大致相似 j，二者在 胃肠道各层分 脾虚 、盐水对照两组均并列 、平行染色 ：切片常 布不 同，必然体现了不同的功能，NO可能对 胃肠道平 规脱蜡入水一O．05％胰酶消化 ，37℃ 30 rain,3％甲 滑肌收缩活动起着至关重要 的作用 ，而VIP则在黏膜分 醇一H，O，液 ，室温30 min一1：20正常 山羊血清封 闭内 泌活动中的调节作用更大些 。 源性过氧化物酶室温30 min一分别滴加兔抗VIP抗体 脾虚组nNOS较正常对 照组表达强 ，其 阳性颗粒是 (1：50稀释)和兔抗NOS抗体 (1：20)稀释，4℃冰箱 最多的，由此可 以得 出这样的推论 ：脾虚组动物 胃排空 过夜一次 日晨将切 片室温静置30 min后--*nNOS~VIP 受限，胃肠蠕动减缓 J，消化道整体功能紊乱 ，可 能与 组分别滴加即用型二抗PV-6000，室温 1h及AP标记 N0S这一抑制性的神经递质释放量的增加有关 ，从而进 的山羊抗兔IgG (1：20稀释)，室温40 min-*VIP组用 一 步导致 胃肠道平滑肌 的收缩功能下降。VIP在脾虚组 DAB—H，O，显色 ，室温20min；nNOS组显色用NBT， 的表达较 空 白对 照组弱 ，则提示脾虚 时nNOS分泌量增 室温25 min一以上各步骤之 间均用PBS液洗3 minX3 多 ，反馈性地抑制 了VIP分泌 ，机体应激性 、反馈性地 次，随后切片上行梯度酒精脱水、二甲苯透 明，加拿大 引起黏膜内分泌功能增强 ，用以代偿 胃排空延 时、蠕动 树胶封片。 减慢所造成 的物理消化功能的明显不足 ，从而在局部免 1．2．2双重染色 疫一神经一内分泌网络的系统水平上 ，给与机体相应 的 双重染色是在 同一张切片上先染VIP再染nNOS， 企 图维持消化功能稳态的相应调节 。VIP含量的减少 ， 各步反应与单染色基本相 同 ，不 同之处是VIP一抗浓 造成了黏膜活动增加 ；nNOS含量的增加 ，消化腺分泌 度改为 1：200稀释 ，二抗改为HRP标记的IgG，一抗经 量增加 ，相应 的化学消化功能加强 ，再次代偿性地弥补 DAB显色后需要用甘氨酸一盐酸一液洗脱室温2 h，再行 了胃肠蠕动排 空延 时的缺陷，减缓了机械 消化的过重负 nNOS染色 ，反应条件改为37~C1h。 荷 。 1．2．3空 白对照组 脾虚组大 鼠胃窦与结肠VIP含量均显著下降 ，这 空 白对照组采用抗体稀释液代替一抗 ，其余各步 与 以往报道显示VIP~HnNOS总是 同升 同降似有矛盾之 骤与试验片相 同，所用抗体及显色剂均 由普博欣公司提 处 …。笔者认为 ，这种现象可能缘于脾虚证 的发病机制 供 。 不同于 胃肠道激惹综合症 、反流性食管炎等其他 胃肠疾 病，同时NO有三种亚型：即内生型 (eNOS)、诱生 2 结果 型 (iNOS)、神经型 (nNOS)。在 胃肠道中以神经型 单染VIP阳性产物为棕色的神经纤维及末梢 ，神经 (nNOS)较多见，本实验主要检测nNOS，而 以往他人 元胞体较少见。主要分布于黏膜下丛 ，肌 间丛相对较 实验多是测定NOS总量的变化 。VIP$][nNOS均属于 胃肠 少见 ，脾虚组较正常对照组 胃窦及 结肠 阳性表达 明显减 道激素 中抑制性神经递质 ，但二者相互影响、相互制约 弱 ，但分布范 围无明显差异 。nNOS阳性产物呈蓝紫色 的精细调节作用机制 ，尚需在分子生物学水平给予进一 的神经元胞体及纤维 ，主要分布于肌间丛 ，黏膜下丛少 步揭示。 见，脾虚组