长型肌球蛋白轻链激酶4Ig结构域的表达及单克隆抗体的制备.pdf

第31卷第4期 南京师大学报(自然科学版) V01．31No．4 2008年 12月 JOURNALOFNANJINGNORMALUNIVERSITY(NaturalScienceEdition) Dec．2008 长型肌球蛋 白轻链激酶4Ig结构域的表达 及单克隆抗体的制备 吕 宁 ，朱春花 ，张文程。，朱敏生 ，陈华群 (1．南京师范大学生命科学学院，江苏省分子医学生物技术重点实验室，江苏 南京 210046) (2．南京大学模式动物研究所，江苏 南京210061) [摘要] 长型肌球蛋白轻链激酶 (1ongmyosinlightchainkinase，L—MLCK)及其分子内结构域的功能还不清楚． 在研究其功能时，特异性抗体是一基本工具，但 目前国际上还没有制备成功特异性较好的抗体．为此，我们先在 大肠杆菌E．coliBI21中重组表达了鸡L—MICK的4Ig蛋白片段(MLCK4Ig)，蛋白经纯化后作为抗原免疫小鼠． 在小鼠血清中检测到特异性抗体的基础上，建立了2株杂交瘤细胞株，获得抗鸡 MLCK4Ig的单克隆抗体．该抗 体可以特异与鸡L—MLCK和鸡 MLCK4Ig反应．本文并对该抗体的特性及应用进行了讨论．结果表明，我们部分 解决了L—MLCK的抗体缺乏问题，为研究L—MLCK及MLCK4Ig片段的功能提供了重要工具． [关键词] MLCK4Ig，蛋白表达 ，单克隆抗体 [中图分类号]Q34l [文献标识码]A [文章编号]1001-4616(2008)04-0124-05 Expression andM onoclonalAntibodyPreparationof4IgFragment ofLongMyosinLightChainKinase L0Ning一，ZhuChunhua ，ZhangWencheng ，ZhuMinsheng。 ChenHuaqun ， (1．TheKeyLaboratoryofMolecularandMedicalBioteehnologyofJiangsuProvince，SchoolofLifeSciences， NanjingNormalUniversity，Nanjing210046，China) (2．ModelAnimalResearchCenter，NanjingUniversity，Nanjing210061，China) Abstract：Thefunctionsoflongmyosinlightchainkinase(MLCK)andthemuhipledomainswithinthemoleculewere poorlyunderstood．Toourknowledge，thereisnospecificantibodyagainstL—MLCK SOfar，whichisessentialforthe studyofL—MLCK．Inthisreport，the4IgfragmentofchickenL—MLCK(MLCK4Ig)wasexpressedbyusingofE．coli BL21system，thepurifiedproteinwasusedasantigentoinduceantibody．Specificantibodywasdetectedintheseraof mouseinjectedwithchickenMLCK4Ig．Wefurtherestablishedtwohybridomacelllinesproducingmonoclonalantibody， whichspecificallyreactedwithchickenMLCK4Igorch