两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究.pdfVIP

第 12卷 第9期 2012年3月 科 学 技 术 与 工 程 Vo1．12 No．9 Mar．2012 1671— 1815(2012)09-2137—05 ScienceTechnologyandEngineering ⑥ 2012 Sci．Tech．Engrg． 医药卫生 两种方法检测汉坦病毒滴度的比较研究 白 露 叶 伟 于蒙蒙 张 亮 于 澜 刘梓谕 吴兴安 徐志凯 张芳琳 (第 四军医大学微生物学教研室，西安 710032) 摘 要 比较双抗体夹心ELISA法与直接免疫荧光(DFA)法在检测汉坦病毒灵敏度方面的差别。用汉坦病毒76一l18株感 染Vem—E6细胞，取不同时间点的病毒感染细胞制备细胞爬片或细胞培养物冻融上清，分别用本室制备的抗汉坦病毒单克隆 抗体标记荧光素或辣根过氧化物酶(HRP)，建立直接免疫荧光法和双抗体夹心ELISA法检测上述细胞中的病毒抗原，并比较 两者的检测灵敏度。用空斑形成实验结果作为金标准，以评价两种方法在检测病毒抗原灵敏度方面的差异。结果：用两种检 测方法测定不同时间点的汉坦病毒培养物抗原，双抗体夹心ELISA法不仅检出的时间早，而且其病毒滴度均较 IFA法高 (P 0．01)。说明ELISA法检测汉坦病毒滴度的灵敏度较IFA法更高，并且操作简单、可重复性好、便于大批量规模化检测，因此 更适用于汉坦病毒的检测。 关键词 汉滩病毒 病毒滴度 双抗体夹心ELISA 直接免疫荧光 中图法分类号 R373．2； 文献标志码 A 汉坦病毒 (hantavirus)属于布尼亚病毒科，是一 比较了两种常用的免疫学检测方法——双抗夹心 种有包膜的单股负链 RNA病毒 』。汉坦病毒主要 法ELISA法 (以下简称 ELISA法)和直接免疫荧光 引起两种急性传染病：一种是 肾综合征 出血热 法 (directimmunofluoreseenceassay，DFA，以下简称 (hemorrhagicfeverwithrenalsyndrome，HFRS)，该病 免疫荧光法)用于体外细胞培养物中的汉坦病毒抗 是我国重点防治的传染病；另一种是汉坦病毒肺综 原的检狈’0，分析其在检测灵敏度方面的异同，以期 合征(hantaviruspulmonarysyndrome，HPS)，主要流 用于替代空斑实验用于病毒滴度的检测。 行于美洲国家。由于汉坦病毒在体外细胞培养时 1 材料和方法 的增殖速度较慢，且不产生明显的细胞病变 (CPE)， 用传统的空斑形成实验计算其空斑形成单位 (plaque 1．1 病毒株 formingunit，PFU)从而确定汉坦病毒感染滴度不仅 76—118株为汉坦病毒汉滩型(HTNV)的代表毒株， 所需时间较长，而且对细胞的要求较高，实验重复性 为本室既往保存毒株。检测前先将冻存病毒经脑内接 较差 。相较于空斑实验，应用免疫学检测结合终点 种小白鼠乳鼠活化扩增，再经Vero．E6细胞传代增殖。 滴定方法计算其TCID50也是 目前比较可靠的方法， 1．2 VeroE·6细胞 具有耗费时间较短、结果可以预测、不同操作个体间 Ver0一E6(非洲绿猴肾)细胞，为本室既往保 存，实验中所用细胞代数不超过 36代。培养条件为 所得到的结果也比较接近等优点。 含不同浓度胎牛血清 (fetalbovineseFum，FBS)的完 因此本文以空斑形成实验结果为对照组，尝试 全RPMI--1640培养基。FBS及 RPMI--1640培养 2012年1月12日收到 国家自然科学基金(30 基均购 自美 国Gibco公司。 、陕西省社发攻关项 目(0210~1—174，0210~1—169)，资助 1．3 抗体 第一作者简介：白 露，女。第