外源精胺对玉米叶片细胞溶质抗氧化防护酶的影响.pdfVIP

一 32一 江苏农业科学 2008年第6期 外源精胺对玉米叶片细胞溶质抗氧化防护酶的影响 薛贝贝，蒋明义 (南京农业大学生命科学学院，江苏南京210095) 摘要：用外源精胺(Spm)处理玉米离体植株可以诱导玉米叶片 H0 的产生和细胞溶质抗氧化防护酶基因的表达及酶活性的提 高，而H：0 清除剂预处理则抑制了上述过程。试验结果表明，外源精胺处理使玉米细胞溶质抗氧化防护能力的提高至少部分是由于 精胺诱导产生的HO 所引起的。 关键词：精胺 ；细胞溶质 ；玉米；抗氧化防护酶 中图分类号：$513．0l 文献标志码：A 文章编号 ：1002—1302(2008)06—0032—03 植物细胞在正常的生理过程中都会产生活性氧 (reactive 将玉米幼苗地上部分用刀片从茎基部快速截取后，放在 oxygenspecies，ROS)，在胁迫条件下更是如此。通常情况下 纯水中2h以消除伤害胁迫，然后进行各种处理 。外源 植物体产生的ROS不足以使植物受到伤害，长期的进化过程 Spm处理浓度分别为0．1、0．5、1．0mmol／L，处理时间为24h， 中植物已经形成了一个完善的ROS的调节系统，使 ROS的 对照为纯水处理。在清除剂试验中，离体植株先分别经H：0 产生和清除维持在一个合适的动态平衡上。超氧化物歧化酶 清除剂过氧化氢酶 (catalase，CAT)、二甲基硫脲 (dimethyhhio． (superoxidedismutase，SOD)、抗坏血酸过氧化物酶(ascorbate urea，DMTU)预处理8h后，再分别用纯水 (对照)、Spm处理 peroxidase，APX)等是植物细胞中主要的抗氧化防护酶。这 12h。清除剂处理均设置 3个浓度梯度，CAT为50、100、200 些抗氧化防护酶有多种分子形式 (同工酶)，位于不同的细胞 U，DMTU为 1、5、10mmol／L。待上述处理后，剪取第二片叶 分隔中…。在响应不同环境胁迫时，不同的机制调控这些同 储存在液氮中，供后继分析使用。上述处理均在温度25℃、 工酶表达，协同作用调节各细胞器ROS的水平，减小不利影 光强200~mol／(m ·s)的条件下进行。 响对细胞的伤害。 1．2 过氧化氢的组织化学定位 多胺 (polyamine，PA)是一类广泛存在于原核生物和真 H202的组织化学测定按Orozco—COrdenas等的方法 J。 核生物中的活性物质，是一类低分子脂肪族含氮碱。高等植 在过氧化物酶存在时，H：0 会与二甲基联苯胺 (3，3’一dia— 物中常见的多胺有腐胺 (putrescine，Put)、亚精胺 (spermi minobenzidine，DAB)反应生成深棕色的多聚产物。把玉米植 dine，Spd)、精胺 (spermine，Spm)等。研究表明，多胺广泛作 株在茎基部用刀片截取后，放于DAB(pH值3．8，5mmol／L) 用于植物生长、形态建成、衰老和对环境胁迫的反应，在多种 溶液中，25qC光下吸收8h后进行各种处理。处理后剪下第 逆境条件下，植物体内多胺含量迅速发生变化 ，参与植物抗逆 二片叶放在95％乙醇中煮沸 15min以除去叶绿素，然后放置 反应的信号转导过程 。多胺对亚细胞区室细胞溶质抗氧 在新鲜的95％乙醇中，待叶绿素完全脱去，观察到的棕褐色 化防护系统的影响，目前尚未见报道。为此，本研究应用组织 颗粒点即为HO：所在部位。 化学、酶活性分析以及半定量 RT—PCR相结合的手段，探讨 1．3 酶活性分析 外源精胺处理对玉米叶片细胞溶质抗氧化防护酶APX、SOD 细胞溶质制备根据Yang等的方法 ；超氧化物歧化酶 活性和cAPX、SOD4基因表达的影响。 (SOD)活性测定根据 Giannopolitis等的方法 ，以