血细胞分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞方法探讨.pdfVIP

2008年 l2月 中国实验动物学报 December，2008 第 l6卷 第6期 ACTA LABORATORIUM ANIMALISSCIENⅡA SINICA V0I．16 No．6 、 e 与] 研究报告 、； e 、 血细胞分离机大量采集实验猕猴外周血单核 细胞方法探讨 孙晓梅 ，曹春渝 ，高家红 ，黄璋琼 ，陆彩霞 ，陈瑜 ，陈洁 ，代解杰 (1．中国医学科学院 北京协和医学院 医学生物学研究所 ，昆明 650118； 2．宝13医生物技术北京有限公司，北京 102206； 3．金宝肾护理产 品上海有限公司，成都 610072) 【摘要】 目的 使用COBESpectra血液成分分离机大量采集实验猕猴外周血单核细胞 (PBMCs)，继而可从中 分离得到外周血造血干细胞 (PBSC)，为进一步利用猕猴开展免疫学研究、基 因治疗提供足够 的 目的细胞 ，探讨采 集 的关键技术 ，建立安全、有效的采集方法 。方法 体重为 4～5kg的实验猕猴 5只，采集前一个月 内分 3次进行 自体或异体血液于4℃储备共 120mL，用于采集时填充管路 。5只猴采集前接受 rhGM．CSF20gg／kg皮下注射动员 4 ～ 5d，麻醉动物后行股动脉穿刺 ，选择 自动外周血干细胞收集程序 (Auto—PBSC)进行采集。采集结束后管路 中血 液以 10mL／min回输给动物 3～5min。结果 生长因子连续注射第 4天外周血 白细胞数增至最高，收获细胞数量随 循环血量和采集次数增加而增多。经动员的所有猴能够采集到需要的PBMC，最多达 9．9×10，采集次数 1～3次， 循环血量达750～1420mL，实验结束后1只猕猴因心脏衰竭死亡。结论 人用血细胞分离机可用于4～5kg实验猕 猴PBMC的大量采集。由于动物不同于人体，为保证采集成功需要选用适合于猕猴的程序，采集前做好储血和生 长因子动员准备，稳定的麻醉保定，提高抗凝剂 比例 ，积极处理并发症是关键。 【关键词】 实验猕猴；外周血单核细胞；造血干细胞；采集 【中图分类号】R33 【文献标识码】A 【文章编号】1005—4847(2008)06—0424—04 CollectionofLargeQuantityofPBMCsofLaboratoryRhesusMacaque byBlood Separator SUNXiao-mei，CaoChun—yu2，GAOJia—hong，HUANGZhang—qiong，LUCai—xia，CHENGYu，CHENGJie，DAIJie—jie (1．InstituteofMedicalBiology，ChineseAcademyofMedicalScienceandPekingUnionMedicalCollege，Kunming650118，China； 2．TaKaRaBiomedicalTechnoloygBeijingCo．，Ltd，Beijing102206；3．CambroMedicalSalesShanghaiCo．Ltd，Chengdu610072) A【bstract】 Objective Alargequantityofperipheralbloodmono