Feulgen染色法的改进及其在蟾蜍红细胞中DNA分子定性定位上的应用.pdfVIP

2oo8年 12月 首 都 医 科 大 学 学 报 Dec．20o8 第29卷 第6期 J0umal0fC印italMedicalUniversity Vol|29 No．6 · 技 术 方 法 · Feulgen染色法的改进及其在蟾蜍红细胞中 DNA分子定性定位上的应用 李宝红 贺 旭 于培兰 王雅梅 孔 璐 尚宏伟 张立新 谢千池 马惠苹 孙 林 侯燕芝 (1．首都医科大学基础医学院细胞与分子生物学教学实验室；2．首都医科大学基础医学院正常人体形态学实验室) Feulgen染 色 法 是 1924年 由Feu1gen及 1．3 实验方法 Rossenbeck提出的经典的特异性显示 DNA分子的形 1)改良shi仟液的配制 态学方法 ¨J。在近一个世纪的时间内，该方法已被广 三角烧杯 内放入双蒸水 100mL煮至沸腾，将准 泛地应用于基础医学、临床医学的许多相关领域，尤 确称取的碱性品红0．5g慢慢倒人沸水中，边放边搅 其是涉及哺乳类动物相关疾病，如人类肿瘤细胞具有 拌至完全溶解，待液体冷却至60℃一70℃时，过滤到 高增生的DNA含量这一生物学特征时 J，多采用 另一容器 中，并向容器 内依次加入 l0mLlmol／／L Feulgen染色法，用以鉴别并协助诊断肿瘤的良恶性， HCL、1gNaHsO，用胶塞塞紧瓶 口，摇荡 NaHsO，至 评价愈后及制定相应的且积极有效的理化治疗方 完全溶解，用黑纸将瓶体包裹严密，放4℃冰箱过夜， 案 。有文献 5报道Feulgen染色法也可用于凋亡 次 日晨取出，室温静置 30min，再加入0．5g活性碳， 细胞及原代培养细胞 DNA分子的检测与鉴定，效果 充分振摇，放置 3Omin后，迅速过滤至棕色瓶中，并用 肯定。 黑纸包好，避光4℃保存备用。 Feulgen染色法的基本原理 ’是利用盐酸在一 2)血涂片的制作 定温度下将DNA分子的双链结构水解并打开脱氧戊 用细长钢针由蟾蜍枕骨大孔刺入椎管内，沿椎管 糖和嘌呤之间的糖苷键，戊糖的一端形成醛基，醛基 腔上下充分搅动以捣毁动物脊髓，待蟾蜍 四肢瘫软， 再与shiff液中的碱性品红特异性结合，形成紫红色发 将其仰卧位固定于手术板上，迅速开胸，暴露心脏，用 色团醌基，从而将 DNA分子定性、定位。本工作在参 眼科剪于左心尖部剪一纵行 1mm切 口，用事先备好 考传统方法的基础上，对原方法在动物类型的选择、 的洁净载玻片蘸取血液一滴，用另一张载玻片的边缘 组织固定、水解所用盐酸浓度、时间、温度等环节进行 以30～45。角倾斜在洁净载玻片上匀速推出一薄层血 了改进，选用少有报道的蟾蜍血细胞为实验材料，对 膜，而后将血涂片放入恒温45℃烤箱 1h备用。 其中的DNA分子进行染色，并应用于实验教学中，力 3)血涂片的染色 图使该技术在材料来源、应用范围、染液保存时限、染 由烤箱内取出血涂片，注意分清正反面并做好标 液重复使用的可靠性等方面得以创新和拓展。 记，放人30mL的立式染色缸中用室温 1mol／／LHcL 1 材料和方法 水解 2min— 0℃预热的同浓度HCL水解6min 室 温 1mol／LHcL重复水解2min一改 良sh 液室温3O L 吓1 min一双蒸水漂洗 2min—l％亮绿水溶液轻复染胞质 成年中等大小的蟾蜍 (首都医科大学动物科学部 30-÷甘油． 明胶封片一÷Olymp 显微镜下观察。 提供)，雌雄不拘。 1．2 主要化学试剂 2 结果和讨论 活性碳，1％肝素，1％亮绿(B