活性污泥样品荧光原位杂交实验方法研究.pdfVIP

第3O卷第 4期 四 川 环 境 Vo1．30．No．4 2011年 8月 SICHUANENVIR0NMENT August2011 · 试验研究 · 活性污泥样 品荧光原位杂交实验方法研究 聂英进 ，孙 晓莹 ，张轶 凡 ，林 姣 (1．天津创业环保集团股份有限公司，天津 300381；2．中国市政工程华北设计研究总院，天津 300074) 摘要：采用细菌通用探针 EUB338，结合DAPI全细胞染色技术，探讨了针对活性污泥样品的荧光原位杂交实验方法， 通过调整样品预处理方法及 固定剂类型得到了较理想的荧光原位杂交图片，可以清晰的辨别被杂交细菌的大小、形态 及分布 ，但与探针 EUB338杂交的细胞和被DAPI染色的细胞 尚不能完全重合，因此仍需进一步改进实验方法。 关 键 词 ：活性污泥；固定；杂交 ；自发荧光 中图分类号：Q一336；X172 文献标识码：A 文章编号：1001-3644(2011)04-0005-04 MethodologyofExperimentonFluorescenceinSituHybridizationExperimentforActiveSludge NIEYing-jin，SUNXiao—ying，ZHANGYi-fan，LINJiao (1．TianfinCapitalEnvironmentalProtectionCompanyLimited，Tianfin300381，China； 2．NorthChinaMunicipalEngineeringDesign＆ResearchInstitute，Tianjin300074，China) Abstract：BacterialuniversalprobeEUB338andDAPItotal cell—stainingtechnologywereusedtoresearchafluorescencein situhybridizationexperimentalmethodforactivesludge．Bychangingpre—treatmentprocedureandtypeoffixative，aseriesof idealpicturesoffluorescenceinsituhybridizationwereobtained，inwhichthesize，shapeanddistributionofthehybridizedcells canbediscernedclearly．However，thecellshybridizedbyprobeEUB338werenotentirelyinaccordancewiththecellsstained byDAPI，SOtheexperimentalmethodshouldbeimprovedfurther． Keywords：Activesludge；fixation；hybridization；autofluorescence 荧光原位杂交 (FluorescenceInSituHybridiza— 的rRNA寡核苷酸探针进行细菌的显微镜观察 J， tion，FISH)是把非放射性的荧光信号基团标记在 随后该技术在系统发育微生物学、微生物生态学、 特异性碱基序列的核酸探针上，再用带有荧光标记 微生物的诊断和周围环境的研究中得到了迅速的发 的探针与固定在玻片或滤膜上的细胞 中特定的核苷 展。目前在单一样品 (如纯培养菌种)检测 中的 酸序列进行杂交，然后在荧光显微镜下对荧光信号 应用已十分普遍 ，准确度较高 ．4j，但在复杂样品 进行辨别和摄像 。FISH技术无需纯培养和分离 (如活性污泥)检测中的应用仍不成熟，易受到样 DNA或RNA，结果能更确切地反映所检测样品中