壳聚糖固定化红树莓超氧化物歧化酶的研究.pdfVIP

维普资讯 北方 园艺2007(2)：31～33 ·试验研究 · 壳聚糖固定化红树莓超氧化物歧化酶的研究 宣 景 宏h，张 春 艳 ，孟 宪 军 (1．沈阳农业大学食品学院，辽宁 110161．2．辽宁省果蚕管理总站，沈阳 110034) 摘 要 ：研究了壳聚糖固定化超氧化物歧化酶的酶学性质。分别以不 同方法对超氧化 物歧化酶进行固定并比较其活力，对固定化方法进行相应的优化，对 固定化超氧化物歧化酶 进行酶学性质测定；研究结果表明以壳聚糖为载体，戊二醛交联法制备 固定化超氧化物歧化 酶 ，优化条件下制备的固定化酶 ，所得壳聚糖酶粉活力较高，热稳定性和酸碱稳定性较游离 酶有很大的提高，且具有良好的贮存稳定性；结论是壳聚糖一戊二醛交联法可用于制备性能 较优 的固定化超氧化物歧化酶 。 关键词 ：超氧化物歧化酶 ；壳聚糖；固定化酶 中图分类号：$662．4 文献标识码：A 文章编号：1001--0009(2007)02--0031--03 树莓也称为覆盆子 ，属蔷薇科悬钩子属植物 。其 上海伯奥生物科技有 限公司，脱乙酰度≥90．09，6，粘 中红树莓营养丰富，各种生物活性物质含量较高 ，具 度 (100cps；其他试剂均为分析纯。 有较高的药用医用价值。 目前我 国各省区红树莓种 l_2 方法 植不断发展，但红树莓活性物质应用方面进展较慢 。 1．2．1 SOD制备 取一定量红树莓果实 ，加 100 红树莓中超氧化物歧化酶含量丰富，有进一步研究价 mL50mmoI／L磷酸盐缓冲液，在冰浴条件下研磨 ， 值。超氧化物歧化酶是广泛存在于生物体 内的金属 9500r／min离心 20min，取上清液加 5O (NH4)2SO4 酶 ，可专一清除细胞外液中存在的与一些疾病和发展 在 4℃下静置 2h，12000r／min离心 30min去除沉 密切相关的超氧 阴离子 (O )，具有抗炎、抗肿瘤 、抗 淀，留取 上 清 液 用 9O (NH ) SO 盐 析 2h， 病毒、防辐射和延缓衰老等作用 ，在化妆品 、食品和医 12000r／min离 心 40min，弃去上清液 ，沉淀用适量 药等领域有着广泛的应用前景 。将其固定化，不但能 50mmol／L磷酸盐缓冲液溶解 ，透析过夜 ，透析液经 保持原有酶活性 ，而且稳定性也有所提高，还兼有可 浓缩后 12000r／min离心 30min，得到 SOD酶浓缩 回收和反复使用等优点 。目前植物中提取 SOD的固 液 ，酶浓缩液过 SephadexG-IOO，收集酶活性部分 。 定化研究较少，该研究以壳聚糖作为载体 ，固定化从 1．2．2 SOD活力测定 NBT光还原法 [5]，以抑制 红树莓 中提取 的超氧化物歧化酶，进行有关其对贮 NBT光还原的5O 的酶液量为一个酶活力单位 (U)。 存 、热 、pH 的稳定性等酶学性质研究 的结果。 1．2．3 固定化 SOD的制备 1 材料与方法 1．2．3．1 壳聚糖一戊二醛交联法 精密称取 2．Og 1．1 材料 壳聚糖粉 ，加入 25mL0．3 的戊二醛溶液 ，室温下搅 拌 3h后，置 4℃下放置过夜 ，抽滤，并用 5OmL磷酸 超氧化物歧化酶 (Superoxidedismutase，以下简 称 SOD)：红树莓 中提取，酶活力 192U／ml；壳聚糖 ： 盐缓冲液分 5次洗涤，得到淡黄色活化 的壳聚糖粉 末 ；取 0．50g活化