应用MPT64检测建立结核分枝杆菌药敏新方法的初步探索.pdfVIP

第 29卷第 4期 实 验 与 检 验 医 学 V01．29No．4 2011年 8月 EXPERIMENTAL AND LAB0RAT0RY MEDICINE Aug．2011 · 实验研究 · 应用 MPT64检测建立结核分枝杆菌药敏新方法的初步探索 尹小毛 ，谢 贝 ，罗春明z，黄丽晶 ，蔡杏珊 z，李昕洁 ，刘志辉 (1、F-N市胸科医院肺部疾病研究所 ；2、检验科 ；3、科教信息科 ，广东 广州 510095) 摘 要：目的 初步探索应用 MPT64检测建立一种结核分枝杆菌(Mycobocteriumtuberculosis．MTB)药敏新方法的可行性．确定药 敏方法 的实验条件和实验程序 方法 通过检测 MTB标准株和临床株的MFrr64分泌，验证 MPT64检测用于药敏结果指示的 有效性 ：对不 同方式制备的菌悬液进行 MIyr64检测 ．确定药敏方法 的接种程序。 结果 指示有效性试验 中，MTB标准株和 60 株 MTBl临床株的菌悬液 MPT64检测均 阳性 ：药敏接种程序确定试验中，直接挑取菌落方式配制的各种浓度 MTB菌悬液(分别 为 1、0．1、0．ol和 0．001mgm／1)MPT64检测均阳性 ，而生理盐水洗涤方式配制 的各种浓度 MTB菌悬液 (分别为 1、0．1、0．01和 0．001mgm／1)MPT64检测均阴性 结论 MPT64检测能有效指示 MTB的生长 ：洗涤方式制备菌悬液可避免 MTB原代菌株产生 的MPT64被带人培养基 中．从而能够更真实地反映无药和含药培养基 中MTB的生长情况 关键词 ：结核分枝杆菌；药物敏感性试验；MPT64；生长指示物 中图分类号 R378．91+1。R446．5．Q939．92 文献标识码A 文章编号 1674—1129(2011)04—0371—02 doi：10．3969／i．issn．1674—1129．2011．04．014 结核 分枝 杆 菌 (Mycobacterium tuberculosis， 匀后置 121qC灭菌 15min：当锥形瓶温度降至50℃左 MTB)药物敏感性测定方法 目前主要有三类 ．即传统 右后 。加入 lOOmlOADC并混匀 ．接着将培养液分装 方法 、仪器方法和分子生物学方法。这些方法各有 至无菌培养管中，每管加入 10ml培养液 分装好的 优势 ，但也都存在一些不足 。MPT64是 MTB生长 M7H9液体培养基于室温放置 3d后观察有无杂菌 早 、中期分泌到周围环境 中的特异性分泌蛋 白}l1．通 生长 ，确认无杂菌污染后方用于MTB的培养。 过检测该蛋 白可问接反映培养基 中MTB的生长情 1．4MPT64检测 采用免疫胶体金法检测标本中的 况 近年来应用 MPT64检测进行 MTB鉴定和检测 MPT64，标记 的抗体为抗 MPT64单克隆抗体 。取 的方法不断发展和完善I2131．在此基础上我们尝试应 100t~1标本加人检测板的样本孑L内．室温放置 15～ 用 MPT64检测建立一种结核分枝杆菌药敏新方法 25min后观察结果。出现控制线表示结果有效 ，无控 现阶段我们 已初步确定 了药敏方法的实验条件和实 制线出现表示试剂失效 ，需更换试剂重测 其中控 验程序 ．报道如下 制线和测试线都 出现表示 MVI64检测阳性 ．而只有 1材料与方法 控制线则表示检测阴性 1．1菌株 MTB标准株 H37Rv由深圳市慢性病 防 1．5指示有效性试验 挑取罗氏培养基上生长的新 治中心惠赠 ．6O株 MTB临床株分离 自我 院肺结核 鲜 MTB菌落置于生理盐水中．配制成 0．1mg／ml的 患者的痰液或支气管肺泡灌洗液 ．所有临床菌株均 菌悬液 ．取 100~1菌悬液用于MPT64检测 通过生化试验和分子生物学方法相结合