三元杂交猪IL-18全基因的序列测定及分析.pdfVIP

安徽农业科学，JournalofAnhuiAgri．Sci．2009，37(6)：2413—2415 责任编辑 张蕾 责任校对 吴晓燕 三元杂交猪 儿一18全基因的序列测定及分析 曹素芳，李明，王岩 ，刘长斗 ，朱赞梅 ，唐桂芬 ，肖松云 (1．郑州牧业工程高等专科学校，河南郑州450011；2．郑州 先锋动物药业有限公司，河南郑州 450032；3．河南省大明动物药业有限公司，河南郑州 450027) 摘要 [目的]为进一步研发新型抗病毒制剂和疫苗佐剂、有效控制猪重大传染病奠定基础。[方法]根据 GenBank中猪 白细胞介素-18 基因(见一l8)序列，设计 l对特异性引物，应用RT—PCR方法从河南三元杂交猪脾脏淋 巴细胞 中扩增猪儿一l8基因，并进行克隆、序列测定 和分析。[结果]猪儿．18基因全长为579bp，编码 192个氨基酸的无活性前体蛋白，但前体蛋 白并不合典型的疏水信号肽 ，在第35位氨 基酸残基处有1个潜在的白细胞介素lB转换酶(ICE)剪切位点，剪切后变为具有生物活性的猪IL一18成熟蛋白。序列分析结果表明， 该试验获得的猪儿．18基因与已知猪 肛-18基 因序列同源性很高，均为96％以上，其推导的氨基酸同源性在98％以上。[结论]该研究成 功构建了猪肛一18基因的重组真核表达载体并得到了具有生物活性的瞬时表达产物。 ． 关键词 猪；白细胞介素一18；序列测定；同源性 中图分类号 $852．61 文献标识码 A 文章编号 0517—6611(2009)06—02413—03 SequencingandAnalysisofPorcine／L-18Gene CAOSu—falngetal (ZhengzhouCollegeofAnimalHusbandryEngineering，Zhengzhou，Henan450011) Abstract O『bjective1Thestudyaimedtolaya~undationforthedevelopmentofnewtypeantiviralagentsandvaccineadjuvantssoasto contro1thesevereporcineinfectiousdiseaseseffectively．『Method1Accordingtotheporcineinterleukin．18gene(L／一18)publishedinGen— Bank，apairofspecificprimerswasdesignedoframplifying theporcine ／L一18genefrom the spleenlymphocytesofHenanthree—way cross— breedingpigsbyRT—PCR．Subsequently，thegenewascloned，sequencedandanalyzed．[Resuh]，I}leporcine／L-18genewas579bp，enco— dinganinactiveprecursorproteinwith192aminoacids．Theprecursorproteinhadnotypicalhydrophobicsignalpeptideandcontainedanun— usualleadersequencecomposedof35aminoacidsthatwascleavedofrbiologicalactivitybyInterleukin一1Bconvertingenzyme(ICE)．After comparingthe儿．18geneobtainedinthisexperimentwithotherknownporcine ／L一18genes．itshowedt}latthenUCleotidesequencehomology wasover96％ andthededucedaminoacidhomologywasmorethan98％．IConclusionlTheeukaryoticexpressionrecombinantvectorofrpor- cine ／L—l8genewasconstructedsuccessfully．whichcouldinstantaneouslyexpressproductswithbiologicalactivity． Keywords Porcine；Interleukin一18；Sequencing；