痰标本高压灭菌对结核杆菌抗酸染色及核酸检测的影响研究.pdfVIP

现代实用医学 20l2年 6月 第 24眷 第 6期 · 691 · 5【】 付玲，寇小格 ．艾迪注射液联合化疗药物 6【】 陈惕，陈慧．艾迪注射液联合化疗治疗晚 收稿 日期：2012．03．20 治疗晚期乳腺癌 44例 J【】．实用中医药杂 期卵巢恶性肿瘤的临床研究 J【】．当代医 (本文编辑：孙海儿) 志，2007，23(8)：517． 学，2009，15(22)：157—158． 痰标本高压灭菌对结核杆菌抗酸染色 及核酸检测的影响研究 徐亚丽，胡荣盛，王巧燕，朱振坤 【摘要】目的 探讨痰标本高压灭菌对结核杆菌抗酸染色及结核杆菌核酸检测的影响。方法 将皮内注射用卡介 苗作浓度梯度稀释，比较高压灭菌前后结核杆菌的核酸含量变化，120例临床痰标本高压灭菌前后结核杆菌抗酸 染色结果，以及 100例临床痰标本高压灭菌前后检测结核杆菌核酸结果。结果 高压灭菌前后卡介苗结核杆菌 DNA含量检测差异无统计学意义cPO．05)，120例临床痰标本高压灭菌前后结核杆菌抗酸染色阳性率差异无统 计学意义 (PO．05)：100例临床痰标本高压灭菌前后结核杆菌核酸检测阳性率差异无统计学意义 0．05)。结 论 痰标本高压灭菌可有效防止实验室感染，无需添)~1：1NaOH，能使痰液液化完全，对结核杆菌抗酸染色及核酸检 测结果无显著影响，值得推广。 【关键词】 痰；高压灭菌；结核杆菌；抗酸染色 doi：10．39690．issn．1671-0800．2012．06．053 【中图分类号】 R446 【文献标志码】 A 【文章编号】 1671．0800(2012)06．0691．02 痰涂片抗酸染色镜检是国家开展结 治工作手册》。 酸染色。按照 抗《酸杆菌涂片检查操作 核病控制非常符合成本效益原则的细菌 1．2 标本采集 120例患者，同时留取 程序》操作。(3)PCR方法检测结核杆菌 学实验技术，高质量的痰涂片抗酸染色 2份晨痰标本置于无菌密封瓶，1份直接 核酸。待检标本经离心后，用移液器吸 镜检有其 自身特有的优势 “；实时荧光定 4℃密封保存，另 1份高压灭菌 (121℃， 弃上清，保留50 l左右的沉淀，在沉淀 量 (PCR)方法检测结核杆菌核酸，特异 30min)处理后 4℃密封保存。对 120例 中加入50IalDNA提取液，振荡，混匀 10s， 性强，敏感度高，为临床提供快速准确的 患者高压灭菌前后的标本进行结核杆菌 100℃恒温浴 10min，13000rra／in离心 实验室诊断依据脚。但由于痰标本前处 抗酸染色镜检，并对其中 100名患者高 10min备用。标准品与标本各 2ul加入 理过程中容易产生气溶胶，造成严重的 压灭菌前后的标本进行 PCR方法检测 PCR反应混合液中(达安公司提供单管 生物危害，以及痰液液化 问题，限制了这 结核杆菌核酸。 反 应 混 合 液)，离 心 30s后置 于 些实验技术在临床的推广应用。本文对 1-3 试剂和仪器 抗酸染色试剂为台 ABI7o00PCR仪上，立即进行PCR扩增 痰标本高压灭菌预处理后进行结核杆菌 湾BASO公司产品；PCR试剂为广东中 反应，扩增条件：93C预变性2min，93℃ 抗酸染色及核酸检测，探讨高压灭菌对 山达安基因诊断有限公司产品；皮内注射 45s，55℃60s扩增 10个循环，93℃30s， 这些实验技术的影响，现报道如下。 用卡介苗为中国生物技术集团公司产品； 55℃45S，扩增 30个循环。根据说明书 PCR仪为美国ABI公司PE7000，OLYM- 的结果判断标准进行结果分析。质量控 1 资料与方法 PUS显微镜。 制根据试剂盒说明设立阴阳性对照、质 1．1 一般资料 选择 2009年 9月至 1．4 方法 (1)卡介苗浓度梯度制备。 控品，严格遵守室内质量控制规程。 2010年 12月浙江省宁海第一医院就诊 将卡介苗安瓿 1支打开后加入0．5ml灭 1．5 统计方法 采用SPSS11．0统计软 的门诊及住院患者 120例，男67例，女 菌蒸馏水溶解，放置约 1min，摇动使之 件进行分析，计量资料