大豆深加工产品定性PCR检测影响因素分析.pdfVIP

第 3期 总第 189期 农业科技与装备 NO．3Tota!NO．189 2010年 3月 Agriculturd ScienceTechnology and Equipment Mar．2010 大豆深加工产品定性 PCR检测影响因素分析 王歆睿，姜 薇，李 红 (辽宁省分析科学研究院，辽宁省标准化体系建设工程技术研究中心，沈阳 }10015) 摘要 ：以大豆内源基因(Lectin)、筛选基因35S启动子 (Cauliflowermosaicvirus5S，CaMV35S)、NOS终止子 (Nopalinesynthase， Nos)和外源基因(CP4EPSPS)为检测对象，对大豆深加工产品的DNA提取方法 、PCR扩增条件的退火温度、引物浓度进行探讨 ， 得出不同DNA提取方法 、退火温度 、引物浓度对大豆加工产品PCR检测的影响，建立了大豆加工食品中转基因成分定性检测体 系。检测结果表明，退火温度600(2、引物浓度0．4IxM时所建立的定性PCR检测方法能有效检测出大豆加工产品中的转基因成分， 而且方法简单 、快速有效。 关键词：转基因；大豆加工产品；定性检测 ；PCR 中图分类号：$565．1；TS207．3 文献标识码：A 文章编号 ：1674—1161(2010)03—0031-03 随着植物基因工程的迅速发展．转基因食品的安 DNAExtractionKitforGMODetction试剂盒 、 全性受到全世界的广泛关注。对转基因产品进行长期 Taq酶 、dNTPs、PCR缓冲液 、分子量 Marker(100～ 有效的监控，并建立快速 、有效的检测体系是农业可 2000bp)及琼脂糖均购 自宝生物工程 (大连)有限公 持续发展的重要保障…。目前，国际上普通认可的转基 司：GoldView核酸染料购 自北京塞百胜基因技术有 因检测方法是利用 聚合酶链 式反应 (Polymerase 限公司；其他试剂均为国产分析纯。 ChainReaction，PCR)对转基因食品成分的遗传背景 缓 冲溶液 A：50mmol／LTris—HCI，pH8．0；10 进行检测 】。 mmol／LEDTA；5mmoU[ 巯基乙醇 ；2％SDS。 大豆是一种重要的农作物，利用其作为原料加工 1．2 主要仪器与设备 的食品种类繁多。由于加工食品的成分复杂，易使检 AppliedBiosystems2720型PCR仪 ：微量移液 测结果出现假阴性。因此。研究各种因素对PCR检测 器；凝胶成像仪；电泳仪 ；低温冷冻高速离心机；恒温 结果的影响．对确保检测结果准确有重要意义。本研 箱；台式离心机。 究探讨了DNA提取方法 、PCR扩增条件 的退火温 1．3 试验方法 度、引物浓度等因素对大豆深加工产品PCR检测的 1．3．1 DNA的提取 将大豆样品用粉碎机粉碎后， 影响，旨在建立一种高效、快速、定性检测大豆加：产 称取 100mg；豆粉、豆奶、豆腐样品直接称取 100mg； 品中转基因成分的方法。 豆浆样品混匀后吸取 15mL，分别用不同方法进行提 1 材料和方法 取 DNA。 1．1 材料与试剂 1)CTAB方法：①将样品置于 1．5mL离心管中， 大豆加工食品均购于超市：引物 由宝生物工程 加入 600 ICTAB缓冲液，振荡均匀，于 65℃温育 (大连)有限公司合成(见表 1)。 30min后 ，加入 500txL酚 、三氯 甲烷和异戊醇 表 1 引物序列及扩增产物大小