玫瑰黄链霉菌几丁质酶基因的克隆及拼接表达.pdfVIP

维普资讯 农业生物技术学报 JournalofAgriculturalBiotochnology 2007，15 (12： l29~丝 · 研究论文 · 玫瑰黄链霉菌几丁质酶基因的克隆及拼接表达 水 刘力强 ，张维宏 ，李亚宁 。，杨文香 ，刘大群 ¨ (1．河北农业大学植物保护学院，河北省农作物病虫害生物防治工程技术中心，保定071001； 2．华北制药集团新药研发有限责任公司，石家庄050015) 摘要：应用PCR扩增克隆到玫瑰黄链霉菌(Saeptomyccsroscoflavus)的几丁质酶基因chiC的整个催化域部分，将其与包 含信号肽区、纤维素结合区、几丁质结合区三个结构功能域的链霉菌(s．1ividans)chiC基因片段相连接 ，插入pET23b(+)质粒 上，构建表达载体pLCH，用来转化大肠杆菌 (Escherichiacoli)JM109(DE3)，转化子进行破壁之后在胶体几丁质酶培养基上表 现活性。 关键词：玫瑰黄链霉菌：几丁质酶；克隆；表达 中图分类号：S188 文献标识码：A 文章编号：1006．1304(2007)01—01294)4 CloningofChitinaseGenefrom Streptomycesroseoflavus andItsSplicingExpressioninEscherichiacoli LIULi—qiang ，ZHANGW ei—hong。，LIYa-ning。，YANGW en-xiang。，LI-UDa—qun rJ．CollegeofPlantProtection,BiologicalControlCenterofPlnatDiseasenadPlnatPestsofHebeiProvince,AgriculaualUniversity ofHebei，Bna ding071001，China；2．NewDrugResearchna dDevelopmentCo．，Ltd．ofNorthCMna PharmaceuticalCorporation,Shijiazhuaag050015,China) Abl~aeeAftergettingthechC／catalyticdomainofStreptomyeesmesoflavusbyPCR,htecatal：cdomainwasconnectedwiht s．1ividansctuCfragmentwhichcontainsthreedomains (cellulosebnidingdomain，chitin-bnidingdomainandsignalpcptidedomain) andclonednitopET23b(+)．Thne hterecombinantplasmidpLCHWastransformednitoEscherichiacoliJM 109(DE3)．Afterhte嘶 s· formatexpressionWas niducedwiht IPTG,itschitinaseactivitywasofundonhtechitinculturemedium． 墨盯 瓤-：Streptomycesroesoflavus；chitinase；cloning；expression 近几年植物抗性基因和病原菌无毒基因的鉴 丁质酶活性。本实验室前期已经建立了基于PCR的 定与分离、真菌酶抑制剂、抗真菌的蛋 白物质等方面 分子检测方法，并以PCR扩增的片段为探针 ，克隆 的研究取得了很大进展。在抗真菌蛋白方面，报道最 到了玫瑰黄链霉菌Men．myco．93—63的完整的几丁 多的是几丁质酶(郑秀芳等，2002)。几丁质酶可降解 质酶基因的催化域，并在大肠杆菌中进行了异源表 真菌的细胞壁主要成分几丁质，其降解的结果导致 达；但重组质粒没有表现出几丁质酶活性