结核病与BCG疫苗接种个体TaqMan探针荧光定量PCR诊断方法的建立及初步应用.pdfVIP

第 32卷 第 12期 中 国 预 防 兽 医 学 报 VO_【32．No．12 2010 年 l2 月 ChineseJournalofPreventiveVeterinaryM edicine Dec． 2010 doi：10．3969~．issn．1008—0589．2010．12．10 结核病与 BCG疫苗接种个体 TaqMan探针荧光定量 PCR诊断方法的建立及初步应用 王春雨 ，杨 莉 ，王振 国 ，刘金华 ，宋 占昀 ，周 亮 -，王宝任 ，王全凯 t (1．吉林农业大学 ，吉林 长春 130118；2．吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，吉林 长春 130062； 3长春净月开发区玉潭镇政府畜牧站，吉林 长春 130322) 摘 要 ：为快速鉴别诊 断结核病 (TB)，本研 究以GenBank登录的致病性结核分枝杆菌复合群 、人型结核杆菌 和牛分枝杆菌特有基 因为对象，设计并合成 引物及探针 ，建立 TaqMan探针荧光定量PCR检测方法。实验结果表 明，该方法对标准质控 菌株反应呈 阳性 ，对卡介苗(BcG)及其他微生物样 品反应呈阴性 ；对结核分枝杆菌或牛分 枝杆菌标准菌株 的检测灵敏度可达单个菌细胞水平。对45份结核菌素PPD皮肤试验结果为阳性 的临床样本进行 TaqMan探针荧光定量PCR检测 ，36份为阳性 ；而对 PPD检测为阴性的 50份 临床样本进行检测 时，7份 为阳性。 本研究结果表 明，所建立的方法可用于TB的鉴别诊断，可对 由BCG接种或环境中分枝杆菌引起的PPD检测假 阳性样本进行鉴别 ，对TB的快速检测和早期诊 断具有重要意义。 关键词 ：结核病；鉴别检测 ；牛分枝杆菌 ；结核杆菌 ；TaqMan探针PCR 中图分类号 ：$855．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1008—0589(2010112—0952．04 DevelopmentofTaqManreal—timePCR assaysforthedetectionof TuberculosisinBCG—vaccinatedpopulation WANG Chun—yu，YANG Li，W ANG Zhen—guo，LIU Jin—hua2，SONG Zhan-yun ， ZHOULiang，WANGBao—Fen，WANGQuank·ai (1．JilinAgriculturalUniversity，Changchun130118，China；2．JilinEntry—ExitInspectionandQuarantineBureau，Changchun130062，China 3．ChangchunJingyueDevelopmentZoneYutanTownGovernmentAnimalStation，Changchun130322，China) Abstract：Toestablisharapiddetectionmethodfortuberculosis(TB)，areal—timePCRassaysofrspecificdetectionof pathogenic Mycobacterium tuberculosis， Mycobacterium tuberculosis hominis and Mycobacterium bovis were developed， respectively．TheassayswereshowntospecificallydetecttargetMycobacterium up to singlebacterialcell，butnotofrBacille Calme~e—Guefin(BCG)andothermicroorganisms．Teston45purifiedproteinderivative(PPD)skintestpositiveclinicalsamples showedthattheTaqManreal—timePCR coul