全长cDNA中的应用.pdfVIP

·18 · 中国实验血液学杂志　Journal of Experimental Hem atology 2001 ; 9 ( 1) RACE 技术在钓取白血病相关基因 L RP16 全长 cD NA 中的应用 韩为东 　　于 　力 　　楼方定 　　王全顺 　　赵 　瑜 　　史子江 　　靳海杰 ( 中国人民解放军总医院血液科 　　北京 　100853) ( 摘要 　　L RP16 是我们应用甲基化敏感的限制性界标基因组扫描 restriction landmark genomic ) scanning , RL GS 技术时发现的一个与白血病复发相关的新基因。为钓取这一新基因的全长 ( ) cDNA ,本实验采用了 cDNA 末端快速扩增法 rapid amplification of cDNA end , RACE 。通过对 RACE 法若干步骤进行优化 ,克隆得到了 L RP16 基因 cDNA 的 5′与 3 ′非翻译区 ,进而获得其全 长及完整的开放阅读框架 ,并作为新基因被 GenBank 收录。上述结果表明 ,RACE 技术是钓取未 知基因全长 cDNA 敏感而快速的方法 ,尤其是对 5′及 3 ′非翻译区的钓取更具有实用性。 关键词 　　白血病相关基因 　　L RP16 基因 　　cDNA 　　RACE 技术 中国图书资料分类法分类号 　　Q503 　　Q781 　　R733. 7 　　L RP16 是我们用甲基化敏感的限制性界标基 生工生物工程公司。 ( 方法 因组扫描 restriction landmark genomic scanning , ) 总 RNA 的提取 　TRIZOL 一步法提取外周血单 RL GS 技术时发现的一个与白血病复发相关的新 基因[ 1 ] 。从该基因现有的一段 DNA 碱基序列出 个核细胞总 RNA ,1 %琼脂糖凝胶电泳证明其完整 ( 性且无 DNA 污染。紫外分光光度计测 OD260 OD280 发 ,通过与表达的序列标志 expressed sequence tag , ) = 1. 88 。 EST 库电子杂交并进行重叠片段的组装 ,“克隆”得 ( ) 到一段 870 bp 的序列。本研究采用了 cDNA 末端 3 ′末端cDNA 扩增 3 ′RACE 　cDNA 合成 :取 μ ( ( 总 RNA 1 g ,锚定引物 10 pmolL 序列为 5′GGC 快速扩增的方法 rapid amplification of cDNA end , RACE) , 钓取了白血病相关基因 L RP16 的全长 CACGCGTCGACTA GTACTTTTTTTTTTTTTTT TT