抗HCCR单克隆抗体的制备及其鉴定.pdfVIP

实 用 临 床 医药 杂 志 2 · 6 · JournaalooffCClinniiccaallMMeeddiicciinneeinnPractice …0l2 l川l6卷LI3jfJjJ 抗 HCCR单克隆抗体 的制备及其鉴定 郝 波，林 艳，张国新，施瑞华 (南京医科大学第一附属医院 消化实验室，江苏 南京，210029) 摘 要：目的 制备抗人宫颈癌癌基因(HCCR)单克隆抗体 (mAb)，并进行鉴定。方法 以HCCR重纰蛋n免疫 IB／c 小鼠，取免疫小鼠的脾细胞和同系小鼠的骨髓瘤细胞 SP2／0进行细胞融合，常规筛选杂交瘤细胞。腹水j秀导法制箭抗人 tlCCR 单克隆抗体，并经蛋白A亲合层析进行纯化。用Westernblot和免疫荧光等方法枪测ttCCRmAb的特异H- 刚纯化HCCR蛋 白进行包被，建立间接ELISA方法，检测系列稀释的HCCRmAb，确定其灵敏度。结果 筛选flj2株分泌抗人H(：(：I{m 的杂 交瘤细胞株。Westernblot结果表明抗人HCCR抗体能与HCCR蛋白特异性结合，免疫荧光结果 示 癞HepG2细胞rf1胞浆和 胞膜均呈阳性染色。问接ELISA方法检测HCCRmAb的灵敏度可达到 1 g／L。结论 成功删嵛外鉴定了特片性抗人HCCR mAb的杂交瘤细胞株，为进一步深入研究HCCR的生物学特征和临床应用打下基础。 关键词：HCCR；单克隆抗体；杂交瘤 中图分类号：R446．62 文献标志码 ：A 文章编号：1672—2353(2012)03—0006—04 Preparation andidentification ofmonoclonal antibodyagainsthumancervicalcanceroncogene HAO Bo，LIN Yan，ZHANG Guo—xin，SHIRui—hua (TheFirstHospitalAffiliatedtoNanjingMedicalUniversity，Nanjing，Jiangsu，210029) ABSTRACT：Objective Toprepareandidentifymonoclonalantibodyagainsthumancervical canceroncogence(HCCR)．Methods PurifiedrecombinantHCCRproteinwasusedasantigento immunizeBALB／cmice．Theisolatedspleencellsfrom theimmunizedmicewerefusedwithSP2／0． MonoclonalantibodiesagainstHCCR werepreparedbynormalhybridomatechnology．PurifiedmAb waspreparedbyproteinA chromatography．ToidentifythecharacteristicsofHCCR mAbs，Western blotandimmunofluorescencemethodwereemployed．TheindirectELISAWasestablishedwiththepo rifledrecombinantHCCRprotein．andusedtodetectthesensitivityofmAbsagainstHCCR．Results Twohybridomacelllineswhichcouldsecreteanti—humanmAbagainstHCCRwereestablishedbyhy bridomatechnique．SpecificityofmAbagainstHCCRwasassessedbyWestern blot．Immunofluores— cenceshowedthatHCCRpositivestainingoccurredinthecellhyalomitomeandmembraneof