小鼠PGC-1α基因启动子的转录调控功能分析.pdfVIP

546 Medical Science Journal of Central South China,Nov.2013,Vol.41,No.6 文章编号:2095-1116(2013)06-0546-05 ·基础医学· 小鼠PGC鄄1琢基因启动子的转录调控功能分析 1 2 1 2 1 2 冉摇 莉 ,涂摇 晶 ,肖新华 ,钟摇 警 ,洪摇 涛 ,文格波 (1.南华大学附属第一医院内分泌科,湖南衡阳,421001; 2.南华大学附属第一医院临床研究所) 摘摇 要:摇 目的摇 克隆小鼠PGC鄄1琢基因的启动子并分析其转录调控模式。 摇 方法摇 设计引物,以小鼠肝脏组 织DNA 为模板,PCR扩增PGC鄄1琢 基因启动子区并克隆入荧光素酶报告基因表达载体pGL3鄄Basic 中,构建具有 PGC鄄1琢启动子转录活性的报告质粒pGL3鄄PGC鄄1琢鄄Luc。 通过特异性引物,引入替换碱基突变相关转录因子调控模 序,构建点突变融合载体,并将其转染1c1c7 及c2c12 细胞系,检测荧光素酶的表达情况。 摇 结果摇 构建的pGL3鄄 PGC鄄1琢鄄Luc 系列报告质粒经过酶切鉴定及DNA 测序分析都显示正确;PGC鄄1琢基因启动子区域(-2533 ~ +78) 具有较强的转录活性;突变失活PGC鄄1琢基因启动子区域中的CRE及IRE反应原件导致转录活性明显降低。 摇 结 论摇 成功构建小鼠PGC鄄1琢基因启动子报告质粒,PGC鄄1琢 基因上游区域(-2533 ~ +78)具有较强的启动子活性; 启动子区域中的CRE和IRE反应原件为主要转录调控位点。 关键词:摇 PGC鄄1琢;摇 启动子;摇 转录调控;摇 小鼠;摇 肝脏 中图分类号:Q291摇 摇 摇 文献标识码:A Analyzing the Transcription Regulation Function of PGC鄄1琢Gene Promoter in Mouse RAN Li,TUJing,XIAO Xinhua,et al (Department of endocrinology,the FirstAffiliated Hospital,University of South China, Hengyang,Hunan421001,China) Abstract:摇 Objective摇 To clone the promoter of mouse PPARg co鄄activator 1琢(PGC鄄1琢)gene and analyze its tran鄄 scriptional regulation mode.摇 Methods摇 TakethemicelivertissueDNAasatemplateandtheprimersweredesigned,then this promoter was cloned by PCR and transfected it into the luciferase reporter gene expression vector pGL3鄄Basic.The re鄄 port plasmid pGL3鄄PGC鄄1a鄄Luc contained transcription activity of PGC鄄1 promoter was built.Building the point mutation fusion vector by inserting specific primers th