噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核分支杆菌的应用比较.pdfVIP

维普资讯 广东医学 2008年3月 第29卷第 3期 GuangdongMedicalJournalMar．2008，Vo1．29，No．3 · 441 · 噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核 分支杆菌的应用 比较木 甘兵 张天托。 王栋 朱家馨。黄静。刘慧。 中山大学附属第三医院呼吸内科(广州510630)；广东省佛山市顺德区龙江医院~ ff(528318) 摘【要】 目的 研究噬茵体生物扩增法与涂片法对结核诊断价值的比较。方法 对52份临床诊断为结核 (包括肺结核、结核性胸膜炎、结核性腹膜炎、结核性脑膜炎)的患者的痰标本、胸腔积液、支气管肺泡灌洗液、腹 水、脑脊液等标本以及COPD急性发作、肺癌、急性支气管炎患者的痰液 16例同时进行噬茵体生物扩增法与涂片 法检测。结果 52份结核标本，有29份标本通过噬茵体生物扩增法检测结果为阳性 ，阳性率56％ (29／52)，显著 高于涂片法染色的阳性率 23％(12／52)，(P0，05)，其中12例涂片法阳性的标本均为痰标本，而胸腔积液、支气 管肺泡灌洗液、腹水、脑脊液等标本涂片法检测则均为阴性。噬茵体生物扩增法法对涂片阴性的标本的检 出率高 达48％(19／40)。16例非结核患者的痰液无一例为阳性。结论 噬茵体生物扩增法与传统的涂片法相 比，具有 较高的特异性和敏感性 ，是一种值得推广和很有前景的结核分支杆菌快速快速检测方法。 【关键词】 噬菌体生物扩增法 涂片法 结核分支杆菌 结核病是严重危害人类身体健康的全球性传染性 液标本，再加磷酸缓冲液 (pH6．8)离心20min，弃去上 疾病 ，每年有 800万新发病例，另外有3o0万人死于结 清液前 ，重悬下层沉淀，2000g(至少)离心 15min，弃 核病 ，特别是全球艾滋病的蔓延更加重了结核的传播。 去上清液，重悬沉淀物，无菌条件下吸取 1ml重悬液， 因此，在发展中国家 ，价格低廉、快速 的检测结核的方 加入相应的孵育管中，37℃孵育过夜 (18～24h)。(胸 法是非常重要的。快速、可靠、特异性及敏感性高的检 水、脑脊液、腹水等标本无需去污染，直接离心去上清 测方法是早期诊断、合理化疗、阻断结核病传播的主要 液后重悬沉淀物即可孵育)。②检测过程：取 1ml处 措施。本文通过噬菌体生物扩增法与传统的结核诊断 理后的样品加入反应管中，同时设立阴性对照和阳性 方法涂片法进行对比、评价以及在结核诊断中的应用 对照，阴性对照为反应管中无标本而仅有营养液，阳性 分析，为结核的快速诊断提供新的检测手段。 对照为反应管中加入稀释度为 10。的敏感细胞液，分 1 资料与方法 别加入噬菌体 (Actiphage)，37oC孵育 1h。在每个反应 1．1 一般资料 ①结核组 ：2005年4月至2006年 5 管中加入强效杀毒剂溶液 (Viruso1)，充争混匀(确保杀 月在我院诊断为结核的病例 52例 (其中肺结核30例 、 病毒剂与反应管内壁完全接触)，置于室温5min(严格 结核性胸膜炎 15例、结核性腹膜炎 2例、结核性脑膜 控制时间)。室温放置5min后加入 5ml营养液 +敏 炎5例)，其中男38例，女 14例 ，平均年龄46．3岁 ；② 感细胞溶液。将反应管中的所有反应混合物倒入培养 非结核组 16例 COPD急性发作 、肺癌、急性支气管炎 皿中，加入5ml熔化的琼脂 (55℃左右)，使琼脂和样 患者的痰液，其中男 11例，女5例，平均年龄40．6岁。 本快速混匀，静置成型。37℃孵育 18～24h后观察结 1．2 材料 结核分支杆菌标准菌株H37Rv，耻垢分支 果… 。 杆菌 (指示细胞 ：ATCC607)。结核分支杆菌噬菌体生 1．3．2 涂片法 按照 中国防痨协会制订的结核病细 物扩增试剂盒 (FASTPlaueTB)生产商：英 国BIOTEC 菌学检验规程进行分枝杆菌的涂片检查。 公司。 1．4 结果判断 在各对照组结果正确的条件下 ，观察 1．3 方