NY_T 2004-2011 大豆及制品中磷脂组分和含量的测定 高效液相色谱法.docVIP

中华人民共和国农业行业标准 NY/T 2004—2011 大豆及制品中磷脂组分和含量的测定 高效液相色谱法 Determination of phospholipids in soybean and soybean products— HPLC 2011-09-01 发布 2011-12-01实施前 言 本标准按照GB／T 1.12009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国农业部农产品加工局提出并归口。 本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心。 本标准主要起草人：李培武、张文、王秀嫔、汪雪芳、丁小霞、周海燕、谢立华。大豆及制品中磷脂组分和含量的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了高效液相色谱法测定大豆及制品中磷脂组分和含量的方法。 本标准适用于大豆及制品（豆腐、豆浆、腐乳等）中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇的测定。 本标准磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇线性范围分别为50 μg／mL～4 000 μg／mL、 100 μg／mL～4 000 μg／mI.、150 μg／mL～4 000μg／m。 本标准磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇检出限分别为：10 μg／mL、30 μg／mL、50 μg／mL。 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5491粮食、油料检验扦样、分样法 GB／T 6682分析实验室用水规格和试验方法 试料中的磷脂用氯仿甲醇混合液提取，经氨基硅胶固相萃取柱纯化后，高效液相色谱分离，外标法定量。 除非另有说明，均使用分析纯试剂和GB／T 6682规定的一级水。 氯仿(CHCl3)。 乙酸(CH3 COOH)。 乙醚(CH3CH2CH2CH3)。 甲醇(CH30H)，色谱纯。 正己烷(CH3CH2CH2CH2CH2CH3)，色谱纯。 异丙醇(CH3 CHOHCH3)，色谱纯。 氯仿甲醇混合溶液( 21)：取氯仿(4.1)和甲醇(4.4)混合。 氯化钠溶液( 14.6 g／L)：称取14.6 g氯化钠(NaCl )加水溶解定容到1000 mL。 氯化钙溶液( 1 g／L)：称取1 g无水氯化钙(CaCl2)加水溶解定容到1000 mL。 生理盐水( 1)：取氯化钠溶液(4.8) 50 m和氯化钙溶液(4. 9) 50 mL混合。 氯仿异丙醇混合溶液( 21)：取氯仿(4.1) 40 mL和异丙醇(4. 6) 20 mL混合。 乙酸乙醚混合溶液( 2144)：取乙酸(4. 2) 2 mL和乙醚(4. 3) 144 mL混合。 正己烷异丙醇混合溶液( 11)：取正己烷(4.5) 50 mL和异丙醇(4. 6) 50 mL混合。 磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇标准品：纯度95%。 磷脂标准储备溶液  分别称取磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇50 mg(精确至0.1 mg)，溶解在5.0 mL的正己 烷异丙醇混合溶液(4.13)中得到磷脂酰胆碱质量浓度约为10 mg／mL、磷脂酰乙醇胺质量浓度约为 10 mg／mL和磷脂酰肌醇质量浓度约为10 mg／m的标准储备溶液。该标准储备溶液在4℃下，可以稳定储藏3个月。 分别取上述不同体积磷脂标准储备溶液，分别用正己烷异丙醇混合溶液(4.13)稀释，获得不同浓 度的磷脂作标准溶液，其中磷脂酰胆碱的作标准溶液质量浓度为50 μg／mL、250 μg／mL、800μg／ mL、1 000μg／mL和4 000 μg／mL;磷脂酰乙醇胺的工作标准溶液质量浓度为 μg／mL、250 μg／mL、 800 μg／mL、1 000 μg／mL和4 000 μg／mL;磷脂酰肌醇的作标准溶液质量浓度为150 μg／mL、250μg／ m、800μg／m、l 000 μg／mL和4 000μg／mL. 液相色谱仪，配有紫外检测器，硅胶正相色谱柱。 分析天平：感量0.01 mg和感量0.1 mg。 真空旋转蒸发仪。 超声波提取仪。 离心机。 氮吹仪。 氨基固相萃取柱：6 mL，1000 mg。 粉碎机、机械磨或咖啡磨等。 具塞离心管，50 mL和100 mL。 中速定量滤纸。 试样按GB 5491进行扦取和分样，粉碎后装入样品瓶备用。 固体试样：称取5 g(精确至0.1 mg)固体试样于50 mL具塞离心管(5.9)，加入30 mL氯仿甲 醇混