一步法Real-timeRT-PCR检测HepG2细胞人类白细胞抗原-E基因沉默效率.pdfVIP

2011年 9月第 38卷第 17期 ChineseJournalofPracticalMedicineSep．2011，Vol，38，No．17 · 1 · · 论 著 · 一 步法 Real—timeRT—PCR检测 HepG2细胞 人类 白细胞抗原 一E基 因沉默效率 聂常富 韩风 邱大鹏 王云检 蒙博 陈规划 【摘要】 目的 应用一步法 Real—timeRT—PCR检测不同载体转染 HepG2细胞沉默人类白细胞抗原一E (HLA—E)基 因的效率。方法 分别用 Gal—PEG—PEL／psiRNA、Gal—PEG—PEI／NC—psiRNA、PEG—PEI／psiRNA、 Lipofectamine2000／psiRNA、裸 psiRNA转染HepG2细胞，提取细胞总RNA，一步法 Real—timeRT—PCR检测HLA—E 基因沉默前后 mRNA表达水平。结果 Gal—PEG—PEI组对HLA—E基因的沉默效率为 55％，显著高于PEG—PEI 组、Lipofectamine2000组、裸psiRNA组和阴性对照组(P O．01)。Gal—PEG～PEI组的沉默作用可持续7d。结论 经 一 步法Real—timeRT—PCR检测，Gal—PEG—PEI／psiRNA纳米粒对HepG2细胞HLA—E基因有较高的沉默效率。 【关键词】 Real—timeRT—PCR；RNA干扰；人类白细胞抗原一E Detection ofinterferingefficiencyofHLA ——EmRNA expressioninHepG2cellusingone——stepre-· altimeRT—PCRmethod NIEChang-fu，HANFeng，QIUDa-peng，WANGYun-fian，MENGBo， CHENGui—hua．DepartmentofHepatobiliaryandPancreaticSurgery，HenanTumorHospital，Zhengzhou 450008，China 【Abstract】 Objective ToevaluateinterferenceefficiencyofHLA—EmRNAexpressionin HepG2celltransfectedwithdifferentpsiRNA carrierusingone—steprealtimeRT—PCRmethod．Meth- ods HepG2 cellsweretransfectedbyGa1一PEG — PEI／psiRNA ．Gal—PEG —PEI／NC ～psiRNA． PEG —PEI／psiRNA，Lipofectamine2000／psiRNA and naked—psiRNA respectively．TotalmRNA of HepG2cellswasextracted．Theexpression levelsofHLA —E mRNA weredetectedbyone—stepreal timeRT—PCR．Results TheinterferenceefficiencyofpsiRNA mediatedbyGal—PEG—PEItargetting HL 一Ewas55％ onmRNA expressionleve1．ItwasdistinctivelyhigherthanthoseofLipofectamine2000． PEG—PEIandnaked—psiRNA (P 0．01)。anditsinterferenceeffectcanlastforsevendays．Conclu． sions TheGal——PEG ——PEI／psiRNA nanospheresdisplayperfecthepatocyte——targetingabilityandhave higherinterferenceefficiencytoHLA —E geneinHepG2cellsdetectedbyone—steprealtimeRT—PCR． 【Keywords】 Real—timeRT—PCR；RNAinterference；Humanleukocyteantigen—E 人类 白细胞抗原一E(HLA—E)是功能和作用途 传递，提高机体 NK细胞对肿瘤的杀伤作用，